JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 1:30 דק' • March 4th, 2025
קח רקמת מוח אנושית קבועה פורמלין משובץ פרפין. הרקמה מציגה חיידקים פתוגניים הנמצאים הן בתוך התאים והן מחוץ לתאים.
לשטוף כדי להסיר את פרפין, ולאחר מכן rehydrate את הרקמה באמצעות ירידה בריכוזי אלכוהול.
חממו עם חיץ חומצי כדי לשבור את קשרי הגומלין של החלבונים המושרים על ידי פורמלין, וחשפו אפיטופים אנטיגניים על החיידקים.
דגירה עם אמוניום כלורי כדי לנטרל שאריות של קבוצות אלדהיד תגובתיות שנוצרו במהלך הקיבוע, ולמנוע אינטראקציה לא ספציפית עם נוגדנים.
לטפל עם דטרגנט כדי לחדור קרום התאים, להקל על חדירת נוגדנים.
החל פתרון חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
דגירה עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לחיידקים חוץ-תאיים ותוך-תאיים.
יש למרוח נוגדנים משניים מצומדים פלואורופורים הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
הוסיפו צבע פלואורסצנטי קושר DNA כדי להכתים את הגרעינים.
טפל עם מסלק אוטופלואורסצנטי כדי להרוות פלואורסצנטיות מגרגירים תוך-תאיים אוטופלואורסצנטיים, תוך מזעור אותות רקע.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לבחון את הרקמה כדי לאשר את נוכחותם של חיידקים.