אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:25 דק׳ • March 4th, 2025
התחילו עם רקמת מוח של עכבר במאגר מיצוי המכיל מעכבי פרוטאז וחומר ניקוי.
הומוגניזציה של הרקמה כדי לשחרר חלבונים לתוך החיץ. מעכבי הפרוטאז חוסמים את פעילות הפרוטאז ומונעים פירוק חלבונים.
צנטריפוגה ולאסוף את supernatant עם חלבונים.
הוסף חיץ העמסה המכיל חומר ניקוי וחומר מחזר כדי לנטרל את החלבון.
טען את החלבונים מהבקרה ודגימה על ג'ל SDS-PAGE. הפעילו שדה חשמלי כדי להפריד חלבונים לרצועות נפרדות.
לאחר אלקטרופורזה, להעביר רצועות חלבון על קרום.
טפלו בקרום עם חיץ המכיל חלב נטול שומן כדי לחסום אתרי אינטראקציה לא ספציפיים.
לדגור עם נוגדנים ראשוניים שנקשרים במיוחד לחלבוני טאו פוספורילציה.
לשטוף ולדגור עם נוגדנים משניים מצומדים אנזים.
הוסף מצע שמגיב עם האנזים כדי לייצר אות אור, המאשר את חלבוני הטאו הזרחניים.
פס זוהר אינטנסיבי בדגימה בהשוואה לביקורת מצביע על פתולוגיה נוירודגנרטיבית.