אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:30 דק׳ • March 4th, 2025
התחילו עם חלבוני CSF, כולל אלפא-סינוקלאין שעבר זרחן, סמן ביולוגי של מחלות נוירודגנרטיביות.
הוסיפו מאגר העמסה המכיל חומר ניקוי, חומר מחזר וצבע מעקב.
חממו כדי לנטרל את החלבונים, ואז טענו אותם לג'ל SDS-PAGE.
בצע אלקטרופורזה כדי להפריד את החלבונים על ידי משקל מולקולרי לפסים נפרדים.
לדגור את הג'ל בחיץ כתמים עם תסיסה.
לאחר מכן, העבירו אלקטרו את רצועות החלבון מהג'ל אל הממברנה.
לטפל בקרום עם קיבוע כדי לשמור על החלבון על הממברנה, ולאחר מכן לשטוף.
יש לדגור עם תמיסה חוסמת המכילה נוגדנים ראשוניים ומעכבי פוספטאז כדי לשמור על הזרחן של אלפא-סינוקלאין.
הנוגדנים מתקשרים באופן בלעדי עם אלפא-סינוקלאין זרחני, והריאגנטים החוסמים חוסמים אתרי אינטראקציה לא ספציפיים, ואז שוטפים.
הציגו נוגדנים משניים מצומדים אנזימים המקיימים אינטראקציה עם נוגדנים ראשוניים, ולאחר מכן שטפו.
הוסף מצע כימילומינסנטי, אינטראקציה עם אנזימים ויצירת chemiluminescence.
להקה כימילומינסנטית מאשרת את נוכחותו של אלפא-סינוקלאין זרחני.