JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 1:22 דק' • March 4th, 2025
קח הומוגנט רקמות ממוח יונקים המכיל גם חלבוני פריון נורמליים וגם אגרגטים פריונים מקופלים בצורה שגויה האחראים למחלות נוירודגנרטיביות.
לדגור עם אנזים פרוטאוליטי כדי לעכל את הפריונים הרגילים, ולהשאיר את האגרגטים העמידים שלמים.
טפל באגרגטים עם חיץ דנטורינג בטמפרטורה גבוהה כדי להפוך את החלבונים לליניאריים ולהקנות מטען שלילי אחיד.
טען את הדגימה על ג'ל אלקטרופורזה והפרד את החלבונים ללהקות, מה שמאשר את נוכחותם של אגרגטים.
באמצעות שדה חשמלי, להעביר את החלבונים המופרדים על קרום.
לדגור על הממברנה בתמיסת חסימה כדי להסוות אתרי קישור לא ספציפיים.
לדגור עם נוגדנים מתויגים אנזים peroxidase, אשר נקשרים במיוחד אגרגטים פריון.
שטפו את הממברנה כדי להסיר נוגדנים לא קשורים, תוך מזעור אותות לא ספציפיים.
הוסיפו מצע כימילומינסנטי וחומר מחמצן, המאפשר לפרוקסידז לחמצן את המצע ולהפיק אור.
מדוד את עוצמת האור כדי לכמת פריונים שאינם מקופלים כהלכה בהומוגנאט.