אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:23 דק׳ • March 4th, 2025
קח קטע rehydrated של רקמת המוח האנושי חולה המכיל גופי Lewy, או LBs.
יש לדגור עם תמיסת מי חמצן כדי לעכב פרוקסידאזות אנדוגניות ולמנוע כתמים לא ספציפיים.
חממו את החלק במאגר הציטראט כדי לחשוף אפיטופים של אלפא-סינוקלאין ב-LBs.
החל חומר חוסם כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
הסר את החומר החוסם העודף ודגור על החלק עם נוגדנים ראשוניים המכוונים אלפא סינוקלאין.
לשטוף נוגדנים לא קשורים.
יש למרוח נוגדנים משניים ביוטינילטים הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
הסר נוגדנים עודפים.
הוסף קומפלקסים סטרפטווידין-ביוטין-פרוקסידאז, אשר נקשרים לנוגדנים משניים biotinylated.
לשטוף קומפלקסים לא קשורים.
החל מצע מייצר צבע המגיב עם peroxidase, יצירת משקעים חומים.
מוציאים את המצע העודף.
טפל עם כתם נגדי כדי לצבוע את הגרעינים בכחול, שיפור הניגוד מול אלפא-סינוקלאין מוכתם חום בתוך LBs בציטופלסמה העצבית תחת מיקרוסקופ.