אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:22 דק׳ • March 4th, 2025
התחל עם רקמת מוח אנושית במאגר ליזיס.
הומוגניזציה של הרקמה עם הומוגנייזר כדי לשחרר חלבונים, כולל חומצה גלוטמית דקרבוקסילאז, או איזופורמים של אנזים GAD, החיוניים לתפקוד המוח.
לדגור את ההומוגנט על קרח, ואז צנטריפוגה כדי להשליך את הפסולת. אספו את הסופרנטנט המכיל חלבון.
הוסף חיץ העמסה המכיל חומר ניקוי וחומר מחזר כדי לנטרל את החלבונים.
טען דגימה זו וסמן מולקולרי על ג'ל SDS-PAGE הדרגתי ואלקטרופורזה כדי להפריד את החלבונים לפסים נפרדים.
אלקטרובלוט את החלבונים מהג'ל על יריעת ממברנה.
הוסף סוכן חוסם כדי למנוע איגוד לא ספציפי.
דגירה עם נוגדנים ראשוניים ספציפיים לאיזופורם GAD הנקשרים לאיזופורמים GAD הקולטים שלהם.
יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
לדגור עם נוגדנים משניים מסומנים פלואורסצנטית.
שטפו שוב ודמיינו את רצועות החלבונים במערכת הדמיה.
זהה את רצועות GAD באמצעות פלואורסצנטיות ואשר את הבדלי המשקל המולקולריים שלהם באמצעות הסמן.