אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:28 דק׳ • March 4th, 2025
התחל עם נוזל השדרה, או CSF, שנאסף מאנשים בגילאים שונים.
צנטריפוגו את הדגימה כדי להשליך פסולת תאית ולאסוף את הסופרנטנט.
הסופרנאטנט מכיל חלבונים המעורבים ביצירת נוירונים או ביצירת נוירוגנזה.
קח צלחת multiwell מצופה streptavidin. הוסף סוכן חוסם כדי למנוע איגוד לא ספציפי.
הוסף נוגדני לכידה המסומנים בביוטין סלקטיביים לחלבונים ספציפיים הקשורים לנוירוגנזה.
לדגור עם תסיסה כדי לקשור את הנוגדנים סטרפטווידין, ולאחר מכן לשטוף את הצלחת.
הוסף את דגימת CSF יחד עם נוגדני זיהוי המסומנים ברותניום לבארות, ולאחר מכן לדגור עם תסיסה.
החלבונים הספציפיים הקשורים לנוירוגנזה נקשרים כדי ללכוד נוגדנים ולקיים אינטראקציה עם נוגדני זיהוי בו זמנית.
שטפו היטב את הצלחת והוסיפו חיץ זיהוי.
הניחו את הצלחת במערכת הדמיה.
מאגר הגילוי מפעיל פליטת אור מהרותניום.
ירידה בעוצמת האור על פני הדגימות מצביעה על ירידה תלוית גיל ברמות החלבונים הקשורים לנוירוגנזה, מה שמאשר ירידה בנוירוגנזה.