Name: פפטידים מהספרייה תצוגה phage לווסת את ביטוי הגנים בתאים mesenchymal ו להגביר Osteogenesis ב פגמים עצם Unicortical (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-10T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: חקור שיטות זיהוי פפטידים מספריית תצוגת פאג' לוויסות הביטוי הגני בתאים מזנכימליים ולקידום תהליכי אוסטאוגנזה בריפוי פגמים עצמיים חד-קורטיקליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המכונים הלאומיים לבריאות, AR53579, Osteogenesis: potentiation עם פפטידים חוג עצם המכונים הלאומיים לבריאות, AR056422, השפעת Anabolic של פפטידים Osteogenic המכונים הלאומיים לבריאות, T32 AR050960, התחדשות ותיקון רקמות השלד והשרירים ו DOD, PC051219 Nucleolin: המתווך רומן של סרטן הערמונית ו מח עצם תא האנדותל הדבקה משרד ההגנה, PC061508, סרטן הערמונית Cell-Bone גרורה מח הידבקות מגשרים

<ol><li>Diduch, D. R., Coe, M. R., Joyner, C., Owen, M. E., Balian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+cell+lines+from+bone+marrow+that+differ+in+terms+of+collagen+synthesis%2C+osteogenic+characteristics%2C+and+matrix+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Joint+Surg.+Am%22%5BJournal%5D)">Two cell lines from bone marrow that differ in terms of collagen synthesis, osteogenic characteristics, and matrix mineralization.</a> J. Bone Joint Surg. Am. 75, 92-105 (1993).</li>
<li>Stoddart, M. J., Furlong, P. I., Simpson, A. E., Davies, C. M., Richards, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+in+ex+vivo+cultured+cancellous%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Cells.+Mater%22%5BJournal%5D)">Viability in ex vivo cultured cancellous.</a> Eur. Cells. Mater. 13, 69-70 (2007).</li>
<li>Lehr, J. E., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+adhesion+of+prostate+cancer+cells+to+a+human+bone+marrow+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Preferential adhesion of prostate cancer cells to a human bone marrow endothelial cell line.</a> J. Natl. Cancer Inst. 90, 118-123 (1998).</li>
<li>Schuster, N., Götz, C., Faust, M., Schneider, E., Prowald, A., Jungbluth, A., Montenarh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wild-type+p53+inhibits+protein+kinase+CK2+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Wild-type p53 inhibits protein kinase CK2 activity.</a> J. Cell Biochem. 81, 172-183 (2001).</li>
<li>Cwirla, S. E., Peters, E. A., Barrett, R. W., Dower, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+on+phage%3A+a+vast+library+of+peptides+for+identifying+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Peptides on phage: a vast library of peptides for identifying ligands.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 87, 6378-6382 (1990).</li>
<li>Doorbar, J., Winter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+peptide+antagonist+to+the+thrombin+receptor+using+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a peptide antagonist to the thrombin receptor using phage display.</a> J. Mol. Biol. 244, 361-369 (1994).</li>
<li>Ellerby, H. M., Arap, W., Ellerby, L. M., Kain, R., Andrusiak, R., Rio, G. D., Krajewski, S., Lombardo, C. R., Rao, R., Ruoslahti, E., Bredesen, D. E., Pasqualini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-cancer+activity+of+targeted+pro-apoptotic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Anti-cancer activity of targeted pro-apoptotic peptides.</a> Nat. Med. 5, 1032-1038 (1999).</li>
<li>Goodson, R. J., Doyle, M. V., Kaufman, S. E., Rosenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-affinity+urokinase+receptor+antagonists+identified+with+bacteriophage+peptide+display%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">High-affinity urokinase receptor antagonists identified with bacteriophage peptide display.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 91, 7129-7133 (1994).</li>
<li>Pasqualini, R., Koivunen, E., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peptide+isolated+from+phage+display+libraries+is+a+structural+and+functional+mimic+of+an+RGD-binding+site+on+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A peptide isolated from phage display libraries is a structural and functional mimic of an RGD-binding site on integrins.</a> J. Cell Biol. 130, 1189-1196 (1995).</li>
<li>Pasqualini, R., Koivunen, E., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha+v+integrins+as+receptors+for+tumor+targeting+by+circulating+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Alpha v integrins as receptors for tumor targeting by circulating ligands.</a> Nat. Biotechnol. 15, 542-546 (1997).</li>
<li>Pasqualini, R., Koivunen, E., Kain, R., Lahdenranta, J., Sakamoto, M., Stryhn, A., Ashmun, R. A., Shapiro, L. H., Arap, W., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aminopeptidase+N+is+a+receptor+for+tumor-homing+peptides+and+a+target+for+inhibiting+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Aminopeptidase N is a receptor for tumor-homing peptides and a target for inhibiting angiogenesis.</a> Cancer Res. 60, 722-727 (2000).</li>
<li>Rajotte, D., Arap, W., Hagedorn, M., Koivunen, E., Pasqualini, R., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+heterogeneity+of+the+vascular+endothelium+revealed+by+in+vivo+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Molecular heterogeneity of the vascular endothelium revealed by in vivo phage display.</a> J. Clin. Invest. 102, 430-437 (1998).</li>
<li>Rajotte, D., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+dipeptidase+is+the+receptor+for+a+lung-targeting+peptide+identified+by+in+vivo+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Membrane dipeptidase is the receptor for a lung-targeting peptide identified by in vivo phage display.</a> J. Biol. Chem. 274, 11593-11598 (1999).</li>
<li>Wang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+high-affinity+peptide+antagonists+of+14-3-3+proteins+by+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation of high-affinity peptide antagonists of 14-3-3 proteins by phage display.</a> Biochemistry. 38, 12499-12504 (1999).</li>
<li>Sugahara, K. N., Teesalu, T., Karmali, P. P., Kotamraju, V. R., Agemy, L., Greenwald, D. R., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coadministration+of+a+tumor-penetrating+peptide+enhances+the+efficacy+of+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Coadministration of a tumor-penetrating peptide enhances the efficacy of cancer drugs.</a> Science. 328, 1031-1035 (2010).</li>
<li>Sikes, R. A., Cooper, C. R., Beck, G. L., Pruitt, F., Brown, M. L., Balian, G. Bone Stromal Cells as Therapeutics Targets in Osseous Metastasis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSikes%2C+RA+%22Cancer+Growth+and+Progression.+%22Integration%2FInteraction+of+Oncologic+Growth%22%22">Cancer Growth and Progression. "Integration/Interaction of Oncologic Growth"</a>. Meadows, G., Kluwer, K. H. , Academic Publishers. Boston, MA. 369-386 (2005).</li>
<li>Santos, J. L., Pandita, D., Rodrigues, J., Pêgo, A. P., Granja, P. L., Tomás, H., Balian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor-Mediated+Gene+Delivery+in+Mesenchymal+Stem+Cells+using+PAMAM+Dendrimers+conjugated+with+Osteotropic+Peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Receptor-Mediated Gene Delivery in Mesenchymal Stem Cells using PAMAM Dendrimers conjugated with Osteotropic Peptides.</a> Molecular Pharmaceutics. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

ההפקה של הוידאו הזה מומן על ידי ניו אינגלנד Biolabs, Inc, אשר מייצרת כמה חומרים כימיים המשמשים במאמר זה.

<table><tbody><tr><td>ערכה לספריית פפטידים בתצוגת פאג'ים Ph.D-12</td><td>New England Biolabs</td><td>E8110S</td><td></td></tr></tbody></table>

פפטידים מהספרייה תצוגה phage לווסת את ביטוי הגנים בתאים mesenchymal ו להגביר osteogenesis ב פגמים עצם unicortical

Peptides from Phage Display Library Modulate Gene Expression in Mesenchymal Cells and Potentiate Osteogenesis in Unicortical Bone Defects

שני פפטידים סינתטיים הרומן להאיץ היווצרות העצם ניתן לשלוח באמצעות מטריצת קולגן. מטרת המחקר הנוכחי הייתה לבדוק את ההשפעות על תיקון עצם במודל פגם unicortical. טיפול בתאי mesenchymal המיוצר עלייה בפעילות phosphatase אלקליין, הראה היווצרות גולה על ידי התאים, והגדילה את הביטוי של גנים עבור runx2, osterix, עצם sialoprotein ו osteocalcin. ספוג קולגן ספוגה לתקן קידם פפטיד של פגמים העצם, ואילו השליטה היה פחות יעיל. התוצאות ממחקר זה הראה כי תאים שטופלו mesenchymal פפטיד במבחנה להבדיל כלפי osteogenesis, וכן, כי פפטידים נמסר in vivo באמצעות ספוג קולגן לקדם את תיקון הליקויים unicortical.

ספריה התצוגה phage שימש לזהות רצפי פפטיד כי עצם היעד. המטרה היתה לחקור את ההשפעה של פפטידים אלו על התמיינות תאים mesenchymal ולקבוע את השפעתם על התחדשות העצם.

פפטידים מהספרייה תצוגה phage לווסת את ביטוי הגנים בתאים mesenchymal ו להגביר Osteogenesis ב פגמים עצם Unicortical

שני פפטידים סינתטיים חדשניים מאיצים את היווצרות העצם וניתן להחדירם באמצעות מטריצת קולגן. מטרת מחקר זה הייתה לבחון את ההשפעות...

המטרה הכוללת של ניסוי זה היא לזהות רצפים המגבירים את התמיינות תאים מזנכימליים ומעודדים תיקון עצם. השלב הראשוני הוא בידוד הפאג הנקשר לעצם באמצעות biopanning. לאחר מכן, יש לזהות את רצפי הפפטידים הנקשרים לתאים מזנכימליים, וכן לקבוע את השינויים העוקבים בביטוי הגנים.בצעו ניסויים כדי לקבוע כיצד ניתן להוביל את רצפי הפפטידים לעצם למטרות רגנרטיביות. כשלב סופי, בחנו היסטולוגית את תיקון העצם; שילוב התוצאות יכול לספק תובנות חשובות לגבי מנגנוני התמיינות תאים in vitro ותיקון עצם in vivo. היתרונות של שימוש בטכניקת biopanning עם ספריית phage display הם היכולת שלנו לזהות פפטידים המכוונים לעצם, אשר יכולים לשמש לעידוד התמיינות של תאי מזנכימה ולהגברת תיקון העצם.בסופו של דבר, רצפי פפטידים אלו עשויים להועיל בשיטות טיפוליות לשיקום עצם ולטיפול באובדן מסה של עצם, כגון אוסטאופניה ואוסטאופורוזיס. בהתבסס על מחקר שבו ULA ו-Pascal הראו שניתן להשתמש ב-biop panning כדי לבודד רצפי פפטידים המכוונים לכלי דם, בחרנו להתאיים שיטה זו לבחינת מנגנונים בעצם. עבור הליך ה-biop panning in vivo, הזרמנו 10^10 plaque performing units של ספריית פפטידי ה-phage display מסוג N-E-B-P-H-D 12 דרך לבו של עכבר מסוג valve C בן 10 שבועות.לאחר כחמש דקות, בצעו המתנזיה לעכבר, חשפו ו dissection את עצמות הפמור, חתכו את הקצוות והוציאו את מח העצם. שטפו את עצם הפמור השמאלית, הן מבפנים והן מבחוץ, עם PBS 10 פעמים. לאחר מכן, הוסיפו את העצם לחיידקי ER 2 5 3 7.על מנת להסיר פאג'ים שאינם קשורים, השתמשו ב-2% dried skim milk במזרק עם מחט בכיול 21 כדי לשטוף את התעלה הבינונית של הירך הימנית 10 פעמים. כעת אלוטו את הפאג'ים הקשורים מהתעלה הבינונית באמצעות באפר hydrochloric acid glycine ב-pH 2.2, שנוטרל עם one mo la triss.כדי להרבות את הפאג', יש להוסיף EIT לחיידקי ER 2 5 3 7 ולגדל למשך 4.5 שעות. העבירו בזהירות את העלונות למבחנות חדשות והשקיפו את הפאג' שלוש פעמים על ידי הוספת פוליאתילן גליקול. תמיסת נתרן כלוריד, דגרו את המבחנות למשך לילה בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס.לבסוף, השביו את המשקע ב-TBS עם 0.02% Sodium azide. בצעו זריעה של הפאג'ים על צלחות כדי לקבוע את מספר יחידות יוצרות הפלאקים (PFU) של ה-EITs שהועשרו. חזרו על הליך ה-bio panning in vivo עבור הפאג'ים שנסחפו ועבור אלו שלא נסחפו ארבע פעמים.בצע הגברה של מאגר הפאג'ים (pooled phage) בתרביות חיידקים. טהר וכמת את רצף ה-DNA, ה-DNA הסופי של הפאג', באמצעות פריימר 98 המסופק עם ערכת ה-phage display. חשוב לחשב את תדירות הייצוג של רצף ה-DNA של הפאג'.כעת סנתזו פפטידים הכוללים רצף זרע של glycine glycine glycine sine lysine והרביעו תאי D one, שורת תאים של תאי סטרומה רב-פוטנציאליים ממח העצם של עכבר שפותחה במעבדה שלנו, עד להגעה ל-90% confluence. בצעו Trypsin לתאים וסבבו בצנטריפוגה להשקה ולספירה לצורך צביעת פפטידים; זרעו את התאים על שקופיות עם באריות מצופות ג'לטין וטפחו אותם למשך 24 שעות.שטפו את התאים ב-PBS וקבעו אותם ב-4%paraldehyde למשך 30 דקות. כעת בצעו דגירה לחסימה עם glycine, ולאחריה עם BSA Aden ו-BBSA. תמיסות חסימה של Biotin.הוסף 100 micromolar של פפטידים biotinylated L seven ו-R one. המשך בשטיפת התאים שלוש פעמים עם PBS למשך חמש דקות בכל פעם. הוסף מהילול של 1:1000 של LOR strippin, כסה בנייר אלומיניום והדגר במגירה חשוכה למשך 30 דקות.שטפו את התאים והדביקו את הזכוכיתים עם מדיום קיבוע מסוג vector shield. כעת, נתחו את הפלחיות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי 24 שעות לפני הניתוח. השרו את גלילי הספוג הג'ל.העבירו את גלילי ספוג הג'ל עם פפטיד L seven או R one בריכוז 20 micromolar, או באטנא PBS ללא פפטיד, לצלחות תרבית סטריליות של 12 בארות ושמרו בקירור למשך לילה בטמפרטורה של 4 °C עד למועד הניתוח. הניחו את תרכובת ספוג הג'ל על קרח עד לשימוש.באמצעות מקדח פנאומטי תחת שטיפה של תמיסת סלין, צרו פגם אוני-קורטיקלי (uni cortical) מוארך וגדול ברוחב של 3 mm ובאורך של 8 mm. טפלו בפגם בעצם באמצעות ספוגי ג'ל מוכנים על ידי הכנסת כל הפיגומים המשתלים באמצעות טפיחות עדינות. בצעו הרדמה להריגה (Euthanasia) לחולדות ואספו את השוקיים (tibia) בנקודות זמן מוגדרות; בדקו בקפידה את הפגם בעצם וקבעו את השוקיים שנאספו בפורמלין ניטרלי במעובה של 10% לצורך חיתוך בפרפין.לבסוף, צבעו את כל חתכי הרקמה ב-hematin eosin כדי לסמן את המטריקס העצמי (osteo matrix). Aden המסומן ב-Fluorescein isothiocyanate מאפשר גילוי מיקרוסקופי של קישור פפטידים לתאים שגודלו in vitro. כאן, הפפטידים נקשרים לתאים מזנכימליים בתרבית כדי לקבוע את ההשפעה האוסטאוגנית של פפטידים על תאים.ניתן לטפל בתאים מזנכימליים בתרבית in vitro בפפטידים לבדיקה כדי לקבוע שינויים במורפולוגיית התאים. לדוגמה, ביום הרביעי, התאים מתחילים להתרכז והצבירים גדלים עם הזמן ליצירת קשריות (nodules). באופן מעניין, נתח עצם שנצבע ב-h ו-e מראה פלואורסצנציה עצמית תחת אור UV.ניגודיות גדולה זו בין רקמת העצם לרקמות שאינן עצם מקלה על ביצוע ניתוחים המכמתים את נוכחות העצם בחתכים, במטרה לקבוע את מידת תיקון העצם בפגמים שטופלו ב-gelfoam בתוספת פפטיד. בהשוואה ל-gelfoam לבדו, פגמים שמולאו בתוספת פפטיד הראו את הכמות הגדולה ביותר של תיקון קורטיקלי עם הזמן. בעת ביצוע הליך זה, חשוב להיות שיטתיים ביותר בהזנת הנתונים בשל מספר הדגימות הרב שיצטבר בהכרח לאורך הזמן עד לבחירת קבוצת הפפטידים הסופית.פיתוחו של מיון ביופטיים (biopanning) in vivo כטכניקה לזיהוי פפטידים המכוונים לעצם, פירושו שכעת עומדות לרשותנו תרופות פוטנציאליות שניתן להשתמש בהן כטיפול לשיקום עצם ולמניעת אובדן מסה גרמית. אחד המנגנונים העומדים בבסיס שיקום העצם מעורב גם באובדן מסה גרמית. הבנה מעמיקה יותר של מנגנונים אלו, ופיתוח כלים שניתן להשתמש בהם לטיפול בהפרעות כגון איחוי שברים מושהה ואוסטאופורוזיס, יסייעו בשיפור הטיפולים שניתן לתכנן למטרות רפואיות.

peptides-from-phage-display-library-modulate-gene-expression

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

התמיינות של תאים קודמים לאוסטאוקלסטים מווסתת על ידי ציטוקינים וגורמי גדילה. כאן, מתוארת טכניקה חדשה להעברת גנים להתמיינות של אוסטאוקלסטים in vivo ופרוטוקולי תרבית תאים להתמיינות תאים קודמים לאוסטאוקלסטים במבחנה כשיטה לחקר ההשפעות של ציטוקינים על אוסטאוקלסטוגנזה.

רומן In vivo טכניקה וין העברה במבחנה לחקר אובדן עצם בפרעות השלד והשרירים

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול להמחיש כלי דם היווצרות ויוו ואת בזמן אמת ב- 3D פיגומים על ידי מיקרוסקופ multiphoton. אנגיוגנזה פיגומים מהונדסים נחקרה מודל פגם מאתר calvarial עצם קריטי. עוד כלי דם חדשים התגלו בקבוצה טיפול יותר שולטת.

אנגיוגנזה להמחיש באמצעות מיקרוסקופ Multiphoton Vivo ב מהונדסים גנטית לגרדום 3D-PLGA/nHAp Calvarial תיקון פגם קריטי של העצם

Biomaterials מסטול עם 2 חלבון Morphogenetic (BMP2) עצם שימשו בתור אסטרטגיה טיפולית חדשה ריפוי שברים בעצמות, והמעלית. כדי להתגבר על תופעות לוואי הנובעות שחרור בלתי נשלט של הגורם, אנו מציעים אסטרטגיה חדשה באתר-ישירות לשתק את הגורם, ובכך ליצור חומרים עם יכולות osteogenic משופר.

האתר מכוון הנייח של עצם Morphogenetic חלבון 2 משטחים מוצקים על ידי לחץ על כימיה

אנו מציגים פרוטוקול לחקור את סמנים ביולוגיים של mRNA ביטוי של קרום העצם, נגזר תאים (שיתפקדו) הנגרמת על ידי ויטמין C (ויטמין C), 1,25-dihydroxy ויטמין D [1,25-(OH)2D3]. בנוסף, נוכל להעריך את היכולת של בקר קבוצת מחשבים ראשי להבדיל לתוך osteocytes, chondrocytes ו- adipocytes.

בידוד של גזע Mesenchymal מן האדם קרום העצם מכתשיים ואפקטים של ויטמין D על פעילות Osteogenic של תאים נגזר קרום העצם

אנו מציגים פרוטוקול כדי להשוות את המצב של מינרלים שלפוחית שפורסמו על ידי שתי שורות תאים עצמות אנושיות: hFOB 1.19 ו- Saos-2. הפרופילים שלהם מינרליזציה נותחו על ידי Alizarin אדום-S (AR-S) מכתים, ויזואליזציה אור אולטרה סגול (UV), הילוכים מיקרוסקופ אלקטרונים (TEM) הדמיה, אנרגיה ואנליזת רנטגן microanalysis (EDX).

ניתוח של מינרלים המיוצר על ידי hFOB 1.19 ואלקטרון Saos-2 תאים באמצעות שידור עם אנרגיה ואנליזת רנטגן Microanalysis

בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לסינון פפטידים קטנים התאגד ל-FGFR2 באמצעות ספריית התצוגה הקטנה של phage. אנו לנתח עוד יותר את האהדה של הפפטידים שנבחרו כלפי FGFR2 בתוך מבחנה ויכולתה לדכא את תפוצת התאים.

הקרנה וזיהוי של פפטידים קטנים פילוח הצמיחה פיברוהפיצוץ מקדם Receptor2 באמצעות ספריית Phage התצוגה פפטיד

פרוטוקול זה מתאר מיקרוניתוח לכידת לייזר עבור הבידוד של סחוס ועצם מחלקים קפואים טריים של העובר העכבר. סחוס ועצם יכול להיות דמיינו במהירות על ידי cresyl סגול כתמים ונאסף בדיוק כדי להניב RNA באיכות גבוהה עבור ניתוח transcript.

לכידת לייזר מיקרו חיתוך של העכבר סחוס ועצם עבור ניתוח ביטוי גנים

פרוטוקול זה מתאר שיטה קנונית להבנת הגנים הקריטיים השולטים בפעילות אוסטאוקלסט ב- vivo. שיטה זו משתמשת במודל עכבר מהונדס וכמה טכניקות קנוניות כדי לנתח פנוטיפ השלד.

ניתוח פנוטיפ שלד של מודל עכבר מחיקה מותנית Stat3

בכל מקום הוא שינוי חלבון קריטי לאחר התרגום, dysregulation אשר היה מעורב במחלות אנושיות רבות. פרוטוקול זה מפרט כיצד ניתן להשתמש בתצוגת פאג ' כדי לבודד וריאנטים חדשניים בכל מקום שיכולים לאגד ולווסת את הפעילות של רצועות E3 השולטות על הספציפיות, היעילות והדפוסים של כל מקום.

שימוש בתצוגת Phage לפיתוח אפננים משתנים של אוביקוויטין עבור ליגות E3

הפרוטוקול מציג שיטה לבידוד ליזאטים של חלבונים של תאים שלמים מתהליכי פנים של עוברי עכברים שנותחו או מתאי מזנכים עובריים של עכברים שעברו תרבית, וביצוע כתמים מערביים לאחר מכן כדי להעריך את רמות החלבון שעבר זרחן.

בידוד של חלבון של תאים שלמים ליסאטים מתהליכי פנים של עכברים ותאי מזנכיים פאלטליים בתרבית לניתוח פוספופרוטאין לניתוח פוספופרוטאין

חקור שיטות זיהוי פפטידים מספריית תצוגת פאג' לוויסות הביטוי הגני בתאים מזנכימליים ולקידום תהליכי אוסטאוגנזה בריפוי פגמים עצמיים חד-קורטיקליים.

פפטידים מהספרייה תצוגה phage לווסת את ביטוי הגנים בתאים mesenchymal ו להגביר Osteogenesis ב פגמים עצם Unicortical

גלה סרטונים נוספים