JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:25 דק' • August 29th, 2025
התחל עם מערך מיקרובאר המצופה בשכבה אינרטית על פני השטח השטוח שלו.
הוסף תרחיף של תאי חיידקים למערך, ואפשר להם להתיישב בבארות.
קלף את הציפוי כדי להסיר תאים הקשורים לפני השטח, תוך שמירה על אלה הממוקמים בתוך הבארות.
לאחר מכן, אבטח את מערך המיקרו-באר בין מרווחים.
קח שקופית עם ציפוי לא דביק והפקיד עליה תמיסת מבשר הידרוג'ל המכילה פולימר סינטטי וקישור צולב מומס במאגר.
הפוך את השקופית על המערך והדגירה. הצלב מגיב עם הפולימר ליצירת הידרוג'ל נקבובי הלוכד את התאים.
הסר את השקופית והנח את המערך במדיום התומך בצמיחת חיידקים ומכיל אנטיביוטיקה למניעת זיהום.
החיידקים הכלואים מתרבים למושבות נפרדות מרחבית.
ההידרוג'ל מכיל קישורים צולבים מתכלים הנשברים בחשיפה לאור אולטרה סגול, ומאפשרים פירוק הידרוג'ל ממוקד למיצוי סלקטיבי של מושבות חיידקים.
זרע 700 מיקרוליטר של תרחיפי תאי חיידקים עם OD 600 של 0.1 על מצע מערך המיקרווול והפוך את תמיסת מבשר ההידרוג'ל כפי שהודגם קודם לכן באמצעות 12.5 מיקרוליטר של ATGN מלוח פוספט של pH שמונה. פיפטה 12.5 מיקרוליטר של תמיסת המבשר על מגלשת זכוכית פרפלואורואלקילית, שאינה מגיבה והנח שני מרווחי פלדה של 38 מיקרומטר בשני צדדים מנוגדים של מצע מערך המיקרווול המחוסנים בתאים. לאחר מכן הפוך את שקופית הזכוכית הפרפלואורואלקילית עם טיפת תמיסת המבשר והנח טיפה באמצע מצע המיקרווול.
כאשר ההידרוג'ל נוצר לאחר דגירה של 25 דקות בטמפרטורת החדר, הסר בעדינות את שקופית הזכוכית ממצע המיקרובאר והנח את המצע בצלחת פטרי המכילה מדיה ATGN בתוספת אנטיביוטיקה.