בדיקת שכפול לגיונלה פנאומופילה במקרופאגים שטופלו מראש בשלפוחיות הממברנה החיצונית

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה מקרופאגים שטופלו מראש שנחשפו לשלפוחיות הממברנה החיצונית של חיידקי Legionella pneumophila, או OMVs.

הוסף לגיונלה פנאומופילה ביחס מוגדר של חיידק לתאי מארח כדי להדביק את המקרופאגים שטופלו ב-OMV.

במהלך הדגירה, המקרופאגים מפנימים את החיידקים בתוך פגוזומים הקשורים לממברנה.

טיפול מקדים ב-OMV משנה את איתות המקרופאגים, ומעכב את הבשלת הפגוזום.

זה מקל על היווצרות ואקואול המכיל לגיונלה, המגן על החיידקים ומאפשר שכפול תוך תאי.

הוסף חומר ניקוי ודגר כדי לליז את המקרופאגים. זה משחרר את החיידקים התוך-תאיים לתוך המדיום.

פס את הליזט המדולל על צלחת אגר מועשרת בחומרים מזינים.

במהלך הדגירה, החיידקים גדלים ויוצרים מושבות גלויות.

ספרו את המושבות כדי לקבוע את היחידות היוצרות מושבה, או CFUs, המייצגות את מספר החיידקים בני הקיימא.

השווה את ספירת ה-CFU בין מקרופאגים שטופלו ב-OMV ולא טופלו.

CFU גבוה יותר במקרופאגים שטופלו ב-OMV בהשוואה למקרופאגים שלא טופלו מצביע על כך ש-OMV מקלים על הישרדות הלגיונלה בתוך המקרופאגים.

להדביק תאי THP-1 שטופלו מראש או לא טופלו בתאי ליבה B או BMDM של עכברים מסוג בר עם מוטציה חסרת דגל של זן זה מבלי לשנות את המדיום מהתאים.

הוסף חיידקים ב-MOI של 0.5 שמסתכם ב-1 כפול 10 ל-L.pneumophila החמישי לבאר. דגרו על התרבויות למשך 24 ו -48 שעות בהתאמה. כדי לליז את התאים, הוסף ספונין בריכוז סופי של 0.1% ודגירה על התאים למשך חמש דקות.

לאחר מכן פס 50 מיקרוליטר מהדילולים הנדרשים על צלחות אגר BCYE ודגר את הצלחות למשך שלושה ימים.

ספרו חזותית את המושבות שנוצרו בעין ובצעו חישובים על פי פרוטוקול הטקסט.