הליך לקצירת חיידקים וליזה מכנית

קחו תרבית של Staphylococcus aureus, חיידק עם דופן תא פפטידוגליקן עבה.

לדלל את התרבית במדיה טרייה המכילה אנטיביוטיקה ולדגור אותה בטמפרטורה חמה עם ניעור כדי לקדם צמיחת חיידקים.

העבירו את התרבית לצינור וצנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים.

השליכו את הסופרנטנט והניחו את הכדור על קרח כדי להגן על החיידקים מפני נזק.

השעו מחדש את הגלולה במאגר ליזה והעבירו אותה לצינור המכיל חרוזי סיליקה.

הכנס את הצינור למכשיר ליזה תאים מכני והתחל תסיסה.

התנגשויות מהירות בין החיידקים לחרוזים יוצרות כוחות גזירה. זה משחרר את החיידקים, משחרר קומפלקסים של DNA, RNA וחלבון RNA.

יונים במאגר הליזיס מייצבים מבני RNA, בעוד שחומרים מפחיתים במאגר משביתים אנזימים מפרקי RNA.

כעת, צנטריפוגה את התערובת שוב כדי לגלול את הפסולת.

אסוף את הסופרנטנט המכיל חומצות גרעין וחלבונים להמשך ניתוח.

גדל מושבה אחת של זנים הנושאים פלסמידים pCN51 P3 MS2 sRNA או pCN51 P3 MS2 בשלושה מיליליטר של מדיום BHI בתוספת 10 מיקרוגרם למיקרוליטר אריתרומיצין בכפילויות.

יש לדלל כל תרבית לילה ב-50 מיליליטר של מדיום BHI טרי בתוספת אריתרומיצין כדי להגיע ל-OD 600 של 0.05. גדל את התרביות ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-180 סל"ד למשך שש שעות. העבירו כל תרבית לתוך צינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר וצנטריפוגות את הצינורות ב-2,900 פעמים G למשך 15 דקות בארבע מעלות צלזיוס, ואז השליכו את הסופרנטנט, הקפיאו ואחסנו אותם במינוס 80 מעלות צלזיוס או שמרו את הכדורים על קרח ובצעו ישירות ליזה מכנית של תאים.

כדי לבצע ליזה מכנית של תאים, השעו מחדש את הכדורים בחמישה מיליליטר של מאגר A והעבירו את התאים המרחפים לצינורות צנטריפוגה של 15 מיליליטר עם 3.5 גרם חרוזי סיליקה. הכנס את הצינורות למכשיר ליזה מכני של תאים והפעל מחזור של 40 שניות בארבעה מטרים לשנייה. צנטריפוגה של הצינורות בעוצמה של 2,900 פעמים G למשך 15 דקות, ואז משחזרים את הסופרנטנט ושומרים אותו על קרח.

ודא שהסופרנטנט צלול, חזור על הצנטריפוגה אם לא.