אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:37 דק׳ • August 29th, 2025
קח מושבות חיידקים שעברו טרנספורמציה עם פלסמיד המכיל גן מעורר.
בחר מושבה אחת כדי לחסן מדיה נוזלית טרייה.
דגירה עם טלטול לחמצון וגידול חיידקים הומוגני.
השתמש בדגימת תרבית מדוללת כדי למדוד את הספיגה ולהעריך את צפיפות התאים.
קח צלחת באר עם קירות שחורים ותחתית זכוכית כדי למנוע הצלבת אור בין דגימות, מה שמבטיח כימות מדויק של זוהר.
הוסף את תרבית החיידקים עם ריכוז התאים הרצוי לבארות.
הוסף אנטיביוטיקה כדי לשמור על שימור פלסמיד.
הוסף משרה כדי ליזום ביטוי גנים.
הגן מקודד אנזים המגיב עם חלבון חיידקי ספציפי כדי לייצר אור, ומעניק לחיידקים תכונות ביו-לומינסנטיות.
הנח מכסה על הצלחת כדי למנוע אידוי לפני הנחתו בקורא צלחות מבוקר טמפרטורה עם מצב טלטול קבוע.
במרווחי זמן קבועים, רשום ספיגה כדי למדוד את מספר התאים ועוצמת האור כדי לנטר ביולומינסנציה. מתאם את צפיפות התא עם ביולומינסנציה.
יש לחסן 3 מיליליטר של מדיום עם מושבה אחת מצלחת הלילה, ולדגור על התאים בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס, ו-180 סל"ד למשך כשעה עד שעתיים.
מדוד את צפיפות התאים של דילול של אחד עד עשר של התרבית הנוזלית ב-650 ננומטר. לאחר מכן חשב את היחס והנפח עבור מיליליטר אחד של תרבית עם OD650 של 0.05. פיפטה את נפח התרבות המחושב והמדיום לצלחת 24 קירות שחורים עם תחתית זכוכית.
כדי להבטיח שווקטור ה-pET28a המכיל את כל אופרון הלוקס לא ילך לאיבוד, וזה מתבטא בזן ה-E.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים