שיטת מיקרו-דילול מרק לבדיקת רגישות לאנטיביוטיקה של חיידקים גראם חיוביים

לבודד מושבות חיידקים גרם חיוביות מצלחת תרבית ולהשעות אותן במדיום.

יש לדלל את התרחיף כדי להשיג את ריכוז החיידקים האופטימלי לבדיקה.

חסנו את בארות הבדיקה של מיקרופלייט המכיל ריכוזים הולכים וגדלים של אנטיביוטיקה ליפוגליקופפטיד ובאר בקרת גדילה המכילה רק את המדיום.

מורחים אליקוט מבאר הבקרה על צלחות תרבית כדי לאמת את טוהר התרבית ולספירת חיידקים.

דגירה כדי לאפשר צמיחת חיידקים, במהלכה מסונתז דופן התא.

האנטיביוטיקה נקשרת לפפטידוגליקן, מרכיב בדופן התא, וקודמיו, מעכבת פילמור ומחלישה את הדופן.

ההפרעה מאפשרת ללחץ אוסמוטי לגרום לליזה של תאים.

לאחר הדגירה, יש לאשר את טוהר התרבית וספירת החיידקים האופטימלית.

בדוק את הבארות לאיתור גידול חיידקים.

באר הבקרה מראה צמיחה נראית לעין, בעוד שבאר הבדיקה עם ריכוז האנטיביוטיקה הנמוך ביותר המעכב לחלוטין את הצמיחה מצביעה על הריכוז המעכב המינימלי (MIC).

בהדגמה זו תחוסן צלחת טרייה אחת. להכנת החיסון, בחר מספר מושבות מבודדות היטב מאגר דם של 18 עד 24 שעות או צלחת אגר לא סלקטיבית אחרת. כאן משתמשים בזני בקרת איכות S. aureus ו- E. faecalis.

געו בחלק העליון של כל מושבה עם מטוש סטרילי והעבירו חלק ממנו לצינור המכיל 1 עד 5 מיליליטר של CAMHB או מי מלח. המשיכו להעביר עד שהעכירות תתאים לתקן של 0.5 מקפרלנד תוך 15 עד 30 דקות מההכנה, דללו את החיסון 1 ל-100 ב-CAMHB כדי להגיע לריכוז סופי של חמש פעמים 10 ל-CFU החמישי למיליליטר. הטווח המקובל הוא שתיים עד שמונה פעמים 10 עד החמישי CFU למיליליטר.

מיד באמצעות פיפטה רב-ערוצית עם קצות סטריליים, העבירו 50 מיקרוליטר מהחיסון הסופי לכל באר מתאימה של לוחית לוח המיקרופון. כאן, ארבע שורות מחוסנות עם כל אחד משני המבודדים בסך הכל ארבעה שכפולים לכל מבודד. לאחר מכן, כדי לבצע בדיקת טוהר, השתמש בפיפטה כדי להעביר 1 עד 10 מיקרוליטר מהתמיסה בבקרת הצמיחה החיובית לאגר לא סלקטיבי, כגון אגר סויה טריפטיקאז עם 5% דם כבשים.

השתמש בלולאה סטרילית כדי לפזר את התמיסה על פני הצלחת. סובב את הצלחת 90 מעלות ופס שוב כדי להבטיח שהחיסון יתפזר באופן שווה. מכסים את הצלחת ומניחים בצד.

כהכנה לספירת מושבות, השתמש בפיפטה חד-ערוצית כדי להעביר 10 מיקרוליטר מהתמיסה בבאר בקרת הגידול ל-10 מיליליטר של תערובת מלח, ולאחר מכן להעביר 100 מיקרוליטר למדיום אגר לא סלקטיבי מתאים, כגון אגר סויה טריפטיקאז עם 5% דם כבשים באמצעות לולאה סטרילית, לפזר את התמיסה על פני כל שטח האגר. חזור על תהליך זה פעמיים בכיוונים שונים כדי להבטיח פיזור אחיד של החיסון. לאחר מכן, ערמו עד ארבעה לוחות מיקרופון במיכל פלסטיק וודא שהפאנל העליון אטום היטב עם מכסה.

לאחר מכן הניחו מגבת נייר לחה בתוך מיכל הפלסטיק וסגרו אותה היטב עם המכסה תוך 30 דקות מרגע החיסון. דגרו את לוחות המיקרופון, לוחית ספירת המושבה ולוחית בדיקת הטוהר בחממת אוויר סביבתית בטמפרטורה של 35 פלוס מינוס שתי מעלות צלזיוס למשך 16 עד 20 שעות. למחרת, קרא את ריכוז המעכב המינימלי כריכוז הנמוך ביותר המעכב לחלוטין את צמיחת החיידקים בבארות כפי שזוהה על ידי עין בלתי.

קבע את מספר המושבות בלוחית ספירת המושבות. הכפל את המספר שנספר במקדם הדילול. לדוגמה, 50 מושבות כפול מקדם דילול של 10, 000 שווה חמש כפול 10 ל-CFU החמישי למיליליטר.

טווח מקובל הוא 20 עד 80 מושבות, השווה לשתיים עד שמונה פעמים 10 למושבה החמישית היוצרת יחידות למ"ל. ריכוז החיסון הוא משתנה חשוב לשליטה בבדיקת הרגישות על מנת להשיג תוצאות מדויקות. לבסוף, בדוק את לוחית הטוהר.

אם כל המושבות דומות למושבות המשמשות כחיסון, אז זה יכול להיחשב טהור. אם קיימות מושבות אחרות, אז יש פוטנציאל לנוכחות מזהם בפאנל ה-MIC ויש לחזור על הבדיקה.