אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:58 דק׳ • August 29th, 2025
קח שקופית תא המכילה תאי אפיתל אנושיים עם אנדוזומים עם תווית פלואורסצנטית.
הכניסו חיידקים פתוגניים תוך תאיים ודגרו, ואפשרו להם להיצמד לתאים.
החיידקים מזריקים חלבונים שמארגנים מחדש את השלד הציטולוגי המארח, ויוצרים בליטות ממברנה שמפנימות את החיידקים לוואקולים.
ואקואולים אלה מרחיבים הקרנות צינוריות המתחברות למערכת האנדו-ליזוזומלית, רשת של שלפוחיות ואברונים המווסתים את הסחר התוך-תאי.
הקרנות אלו מכוונות מחדש את הובלת השלפוחית ומעצבות מחדש את המערכת האנדו-ליזוזומלית.
שטפו כדי להסיר חיידקים חוץ-תאיים, ולאחר מכן דגרו עם מדיום המכיל אנטיביוטיקה כדי לחסל את כל החיידקים שנותרו.
החלף במדיום הדמיה נטול סרום המכיל את האנטיביוטיקה, והוסף ננו-חלקיקים המסומנים בפלואורופור מנוגד.
דגירה כדי לאפשר כניסת ננו-חלקיקים באמצעות אנדוציטוזיס והצטברות בשלפוחיות המחודשות.
שטפו כדי להסיר ננו-חלקיקים לא מופנמים, ולאחר מכן דגרו במדיום הדמיה בתוספת סרום.
הננו-חלקיקים הפלואורסצנטיים והאנדוזומים המסומנים מאפשרים הדמיה של העיצוב האנדו-ליזוזומלי המושרה על ידי חיידקים.
כדי להתחיל בהליך זה, יש למדוד את ה-OD 600 של החיידקים התת-מתורבתים ולדלל ל-OD 600 של 0.2 במיליליטר אחד של PBS, להוסיף כמויות מתאימות של חיידקים לתאי HeLa בשקופית תא 8 הבאר כדי להשיג ריבוי זיהום של 100. דגירה למשך 30 דקות בחממת התאים.
שטפו את תאי הלה שלוש פעמים עם PB
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים