אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:46 דק׳ • September 26th, 2025
יש ליטול תרבית Mycobacterium tuberculosis שגדלה במדיום מגביל ברזל כדי להגביר את הפרשת השלפוחיות החוץ-תאיות המכילות סידרופורים, כלאטור ברזל.
צנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים.
אסוף את הסופרנטנט וסנן אותו כדי להסיר שאריות חיידקים.
העבירו את המסנן למערכת אולטרה-סינון מעורבבת ומסנן כדי להסיר עודפי מדיה ולרכז את הרכבים החשמליים.
צנטריפוגה את התרכיז לגלולה פסולת סלולרית.
העבירו את הסופרנטנט לצינור אולטרה-צנטריפוגה וצנטריפוגה כדי לאסוף את כדור ה-EV.
השליכו את הסופרנטנט, השעו מחדש את הגלולה במאגר וערבבו אותה עם מדיום שיפוע בצפיפות מרוכזת ליצירת השכבה התחתונה.
שכבת-על עם ריכוזים הולכים ופוחתים של תווך השיפוע ליצירת שיפוע צפיפות לא רציף.
הוסף חיץ בחלקו העליון וצנטריפוגה. הרכבים החשמליים נודדים לשכבה התואמת את צפיפות הציפה שלהם.
אוספים כל שבר בצינור נפרד.
החלק המטוהר עם EVs המכילים סידרופור מוכן למחקרים במורד הזרם.
העבירו את התרבית לחמישה צינורות צנטריפוגה חרוטיים של 225 מיליליטר וצנטריפוגה בטמפרטורה של 2,850 פעמים גרם למשך שבע דקות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס. אוספים את חומר התרבות בעזרת פיפטה של 50 מיליליטר ומסננים אותו דרך פילטר של 0.22 מיקרון.
כדי לבודד MEVs, העבירו את תסנין התרבית למערכת אולטרה-סינון תאים מעורבבים הממוקמת בארבע מעלות צלזיוס וסננו את התרכיז בלחץ נמוך מ-50 PSI דרך קרום חיתוך של 100 קיל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים