בידוד והעשרה של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בקרום החיצוני מחיידקים

התחל בחיסון מושבה של חיידקים מהונדסים גנטית למדיום נוזלי.

חיידקים אלה מבטאים חלבון היתוך פלואורסצנטי בקרום החיצוני, שכבת הגנה חיצונית.

דגירה כדי שהחיידקים ישחררו שלפוחיות חוץ-תאיות (EVs), ננו-מבנים הקשורים לממברנה המעורבים בתקשורת בין-תאית, המשלבים את החלבון הפלואורסצנטי.

העבירו את התרבית לבקבוק וצנטריפוגה במהירות נמוכה כדי לגלול את התאים.

העבירו את הסופרנטנט המכיל EVs, חלבונים תאיים ופסולת תאים. צנטריפוגה במהירות גבוהה, והסר את הסופרנטנט המכיל פסולת.

סננו את הסופרנטנט דרך ממברנה כדי לחסל את כל החיידקים והפסולת שנותרו.

לחסן דגימה על אגר ולדגור אותה. היעדר היווצרות מושבת חיידקים מאשר את היעדרם של חיידקים.

העבירו את התמיסה למכשיר אולטרה-סינון עם ממברנה חדירה למחצה וצנטריפוגה כדי ללכוד את ה-EVs תוך סילוק חלבונים קטנים יותר.

אסוף את הרכבים החשמליים המרוכזים בצינור לניתוח במורד הזרם.

התחל בחיסון מושבות בודדות של Escherichia coli ל-250 עד 1000 מיליליטר של מרק Luria-Bertani, או LB, באמצעות לולאה סטרילית. לאחר מכן, דגרו את התרבית באופן אירובי באינקובטור רועד ב-300 סיבובים לדקה ו-37 מעלות צלזיוס. לאחר 48 שעות דגירה, הבהירו את מדיום תרבית החיידקים על ידי העברת תרביות התאים לבקבוקי צנטריפוגה מפוליפרופילן בנפח 500 מיליליטר לצנטריפוגה ברוטור בעל קיבולת גדולה וזווית קבועה בארבע מעלות צלזיוס ופי 5,000 G ל