בידוד שלפוחיות חיידקיות חוץ-תאיות באמצעות כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל

0 views • 3:24 min • September 26th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קח כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל או עמודת SEC עמוסה בחרוזי שרף נקבוביים בגודל מוגדר. הוא מכיל מאגר דגימה בחלקו העליון.

הוסף מי מלח עם חוצץ פוספט או PBS כדי לאזן את חרוזי העמודה, והשליך את הזרימה.

טען תסנין תרבית חיידקים מרוכז המכיל שלפוחיות חוץ-תאיות או EVs, חלבונים מופרשים ומזהמים.

EVs הם ננו-שלפוחיות מבוססות שומנים הנושאות מולקולות ביו-אקטיביות ומופרשות על ידי חיידקים.

לאחר שהפילטר נכנס לחרוזים, הוסף PBS כדי להניע אותו דרך מצע השרף.

השלך את הפליטה הראשונית המכילה מזהמים גדולים שאינם שלפוחית.

הניחו צינור איסוף מתחת לשקע והוסיפו PBS ברצף.

EVs גדולים מתחמקים מנקבוביות השרף הקטנות יותר, עוברים דרך החללים הבין-חלקיקיים בין החרוזים ונפלטים ראשונים.

חלבונים ומזהמים קטנים יותר נכנסים לנקבוביות, עוקבים אחר נתיבים ארוכים יותר ונפלטים מאוחר יותר.

אסוף את השברים המוקדמים המכילים EVs ואחסן אותם לניתוח.

לבידוד הרכבים החשמליים, בצע כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל, או SEC, באמצעות עמודה קטנה עם נפח מיטה של 10 מיליליטר עבור פחות מ-100 מיליליטר של חומר התחלתי ועמודה גדולה יותר עם נפח מיטה של 47 מיליליטר עבור יותר מ-100 מיליליטר של חומר התחלתי. במשך מספר שעות לפני הניסוי, הביאו את עמודת ה-SEC וה-PBS לטמפרטורת החדר, ולאחר מכן ייצבו את העמוד במצב אנכי באמצעות מעמד ומחזיק מעבדה סטנדרטיים. לפני החיבור לעמודת ה-SEC, הרטיבו את מאגר הדגימה על ידי מתן אפשרות לחמישה מיליליטר של PBS לזרום דרך הפריט לתוך מיכל פסולת.

לאחר מכן, הברג את מכסה הכניסה של העמוד כדי להוסיף שני מיליליטר PBS למאגר הדגימה וחבר בזהירות את המאגר לעמוד כשה-PBS מטפטף החוצה דרך הפריט. לשיווי משקל של העמודה, הוסף 47 מיליליטר PBS למאגר המדגם, ולאחר מכן פתח את המכסה של החלק התחתון של עמודת ה-SEC. לאחר מכן, אפשר לכל מאגר הדגימה הטעון לזרום דרך העמודה ולהשליך את הזרימה.

לאחר טעינת שני מיליליטר מהדגימה על מאגר הדגימה, אפשר לדגימה להיכנס לעמודה לחלוטין ולאסוף את הזרימה. הוסף מיד PBS למאגר הדגימה בנפח של 14.25 מיליליטר פחות נפח הדגימה כדי לאפשר לתמיסה לזרום דרך העמודה, תוך השלכת הכמות השווה לנפח ריק העמודה. לאחר מכן, מקם מיקרו-שפופרת קשירה נמוכה של שני מיליליטר ישירות מתחת לעמודת ה-SEC כדי לאסוף את הזרימה הראשונה או את השבר הראשון לאחר מתן אפשרות לשני מיליליטר של PBS לעבור דרך העמודה.

המשך להוסיף שני מיליליטר PBS למאגר הדגימה כדי לאסוף כל שבר שלאחר מכן. אחסן את השברים שנאספו בארבע מעלות צלזיוס לאחסון לטווח קצר או מינוס 80 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח הארוך.

07:26

כרומטוגרפיה של אי-הכללת גודל לניתוח הטרוגניות ארסית קרום החיצוני של חיידקים

Related Videos

0 Views

10:46

כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל להפרדת שלפוחיות חוץ-תאיות ממדיית תרבית תאים מותנית

Related Videos

0 Views

09:29

מיקובקטריום שחפת העשרת שלפוחית חוץ-תאית באמצעות כרומטוגרפיית אי-הכללת גודל

Related Videos

0 Views

03:53

בידוד והעשרה של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בקרום החיצוני מחיידקים

Related Videos

0 Views

04:51

אי הכללת גודל הפרדה מבוססת כרומטוגרפיה של שלפוחיות חוץ-תאיות חיידקיות: טכניקה להפרדת אוכלוסייה הטרוגנית של בועיות קרום חיצוני של חיידקים גראם-שליליים בהתבסס על גודלן

Related Videos

0 Views

04:38

טכניקת כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל לטיהור שלפוחיות חוץ-תאיות מיקובקטריאליות

Related Videos

0 Views

10:09

אפיון של תא החיסון-מסחטות נגזרות ושלפוחיות ולימוד השפעה פונקציונלית על סביבת התא

Related Videos

0 Views

09:56

בידוד וטיהור מדרגיים של שלפוחיות חוץ-תאיות מ-Escherichia coli וחיידקים אחרים

Related Videos

0 Views

10:16

אופטימיזציה של פרמטרים למיון ציטומטרי של זרימה לבידוד וטיהור של בועיות חוץ-תאיות קטנות בתפוקה גבוהה

Related Videos

0 Views

06:28

בידוד חד-שלבי של בועיות חוץ-תאיות מדגימות בנפח גדול באמצעות התקן מיקרופלואידי A4F מפוצל

Related Videos

0 Views

Last updated: 1 August 2026