בידוד שלפוחיות חיידקיות חוץ-תאיות באמצעות כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל

קח כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל או עמודת SEC עמוסה בחרוזי שרף נקבוביים בגודל מוגדר. הוא מכיל מאגר דגימה בחלקו העליון.

הוסף מי מלח עם חוצץ פוספט או PBS כדי לאזן את חרוזי העמודה, והשליך את הזרימה.

טען תסנין תרבית חיידקים מרוכז המכיל שלפוחיות חוץ-תאיות או EVs, חלבונים מופרשים ומזהמים.

EVs הם ננו-שלפוחיות מבוססות שומנים הנושאות מולקולות ביו-אקטיביות ומופרשות על ידי חיידקים.

לאחר שהפילטר נכנס לחרוזים, הוסף PBS כדי להניע אותו דרך מצע השרף.

השלך את הפליטה הראשונית המכילה מזהמים גדולים שאינם שלפוחית.

הניחו צינור איסוף מתחת לשקע והוסיפו PBS ברצף.

EVs גדולים מתחמקים מנקבוביות השרף הקטנות יותר, עוברים דרך החללים הבין-חלקיקיים בין החרוזים ונפלטים ראשונים.

חלבונים ומזהמים קטנים יותר נכנסים לנקבוביות, עוקבים אחר נתיבים ארוכים יותר ונפלטים מאוחר יותר.

אסוף את השברים המוקדמים המכילים EVs ואחסן אותם לניתוח.

לבידוד הרכבים החשמליים, בצע כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל, או SEC, באמצעות עמודה קטנה עם נפח מיטה של 10 מיליליטר עבור פחות מ-100 מיליליטר של חומר התחלתי ועמודה גדולה יותר עם נפח מיטה של 47 מיליליטר עבור יותר מ-100 מיליליטר של חומר התחלתי. במשך מספר שעות לפני הניסוי, הביאו את עמודת ה-SEC וה-PBS לטמפרטורת החדר, ולאחר מכן ייצבו את העמוד במצב אנכי באמצעות מעמד ומחזיק מעבדה סטנדרטיים. לפני החיבור לעמודת ה-SEC,