אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:05 דק׳ • September 26th, 2025
התחל עם בארות המכילות תאי CD4+ T המבטאים קולטנים ספציפיים לפפטיד האובולאבומין או OVAp.
לתוך באר הבקרה השלילית, הניחו תוספת קרום נקבובי.
בשפופרת, קח תאים דנדריטיים הנגועים בחיידקים ועמוסים ב-OVAp להצגת פני השטח.
הוסף תאים דנדריטיים ישירות לבאר הבדיקה ולתוך התוספת בבאר הבקרה השלילית.
הוסיפו מדיה לבארות ודגרו.
בבאר הבדיקה, תאים מתקשרים ליצירת סינפסה אימונולוגית, המאפשרת העברת חיידקים מהתא הדנדריטי לתא T, תהליך המכונה טרנס-זיהום.
בבאר הבקרה השלילית, מחסום הממברנה מונע אינטראקציה בין תאים ובכך מעכב זיהום טרנס.
הוסיפו את האנטיביוטיקה גנטמיצין לבארות ודגרו.
ג'נטמיצין אינו יכול לחדור לתאים אוקריוטיים, ובכך הורג רק חיידקים לא מופנמים בעוד חיידקים מופנמים שורדים.
דגימת הבדיקה המכילה תאי T נגועים ודגימת הבקרה עם תאי T לא נגועים מוכנות כעת לבידוד תאי T וכימות טרנס-זיהום.
לצלחת תרבית של 24 בארות, הוסף שני מיליון תאי CD4+ T בנפח של 0.5 מיליליטר לכל אחת מחמש בארות.
לאחר מכן, כדי לשלוט במגע פיזי, הנח מחסומי בארות טרנס-באר פוליקרבונט בגודל נקבוביות של שלושה מיקרומטר לבארות השלישית והרביעית. לבאר הראשונה, הוסף 0.1 מיליליטר של התאים הדנדריטיים העמוסים יתר על המידה. לבאר השנייה, הוסף 0.1 מיליליטר של התאים הדנדריטים הלא טעונים הנגועים.
הוסף 0.1 מיליליטר של תאים דנדריטיים נגועים עמוסים יתר על המידה לבאר אחת, ו-0.1 מיליליטר של התאים הדנדריטים הנגועים שאינם טעונים לבאר השנייה. לבסוף, כבקרה שלילית, להדביק ישירות את הבאר החמישית של תאי CD4+ T ב-MOI של 10. לאחר מכן, הביאו את הנפח הכולל של הבאר עד 0.6 מיליליטר עם RPMI.
דגרו על הצלחת למשך 30 דקות כדי לאפשר לסינפסות חיסוניות להיווצר. לאחר הדגירה מוסיפים 100 מיקרוגרם ג'נטמיצין למיליליטר מדיום לכל באר, ודוגרים למשך שעה. גנטמיצין הוא אנטיביוטיקה אמינוגליקוזידית שאינה מסוגלת לחדור לתאים אוקריוטיים.
לכן, בשלב זה, אמינוגליקוזיד יהרוג חיידקים חוץ-תאיים אך לא חיידקים תוך-תאיים.