בדיקת פוטוטקסיס של ציאנובקטריה חוטית באמצעות תאורת אור ממוקדת

התחל עם צלחת המכילה תרבית ציאנובקטריה חוטית הממוקמת מעל חלון קטן המצויד במחזיק LED בחדר חשוך.

הנורית מאירה את המנה מלמטה ויוצרת אזור אור קטן.

במהלך הדגירה, הציאנובקטריה החוטים נודדים לעבר המרכז המואר, ומדגימים פוטוטקסיס.

עם הזמן, הציאנובקטריה נודדים ומצטברים במרכז המואר, ויוצרים אזור חיידקים צפוף בעליל.

לאחר הדגירה, הניחו נייר לבן מתחת לכלי כדי לשפר את הניגודיות.

צלם תמונה של האזור המואר ונתח אותה באמצעות תוכנה.

צייר קו על פני הצלחת שעובר דרך מרכז אזור החיידקים כדי ליצור פרופיל עוצמת פיקסלים.

השוו את עוצמת הפיקסלים הממוצעת מחוץ לאזור החיידקים ובתוכו.

לאחר מכן, ציירו קו בעוצמה המקסימלית בתוך האזור המרכזי כדי לקבוע את הקוטר של אזור החיידקים, שמייצג פוטוטקסיס ציאנובקטריאלי.

הכן מחזיקי LED שבהם מותקנות נורות ה-LED של חמישה מילימטר כדי להקרין שטח של 20 מילימטרים רבועים מלמטה למעלה. מדוד והתאם את עוצמות ה-LED. ודא שכל ההגדרה נמצאת בחדר חשוך או במיכל סגור וחשוך.

מניחים שמונה מיליליטר מהמדיום המכיל P. lacuna בצלחת פטרי של שישה סנטימטרים, סוגרים את צלחת הפטרי עם המכסה ומניחים אותה על מחזיק LED כך שהנורית תהיה במרכז צלחת הפטרי. לאחר יומיים בדרך כלל, צלם תמונה של צלחת פטרי עם מצלמת סמארטפון המכוונת ישירות למיקום הטיפול באור. השתמש במחזיק ובסדין לבן כרקע כדי להבטיח את אותו מרחק ותנאי תאורה לכל תמונה.

פתח את תוכנת ImageJ, לחץ על קובץ, פתח ובחר את הקובץ. לאחר מכן, לחץ על Enter. בחר בכפתור הישר ולחץ על כפתור העכבר השמאלי כדי לצייר קו מקצה אחד של צלחת הפטרי לקצה הנגדי.

ודא שהקו עובר דרך מרכז מעגל החוטים. לחץ על נתח ומדוד כדי לראות את אורך צלחת הפטרי. לאחר מכן, לחץ על נתח והתווה פרופיל בתפריט ImageJ.

העריכו ערך ממוצע לעוצמת הפיקסלים מחוץ למעגל וערך ממוצע נוסף לעוצמת הפיקסלים בתוך העיגול. הצבע את העכבר על מיקום Y בין ערכים אלה כדי להעריך את ערכי ה- X של שני צידי המעגל. שים לב לשני הערכים וחשב את ההפרש.

לאחר מכן בחרו בלחצן הישר וציירו קו בערך המרבי האמצעי של עוצמת הפיקסלים. לבסוף, לחץ על נתח ולאחר מכן למדוד כדי לקבל את אורך מעגל התא הפנימי.