הדמיה פלואורסצנטית של זיהום חיידקי הקשור לביו-חומר בעוברי דג זברה

התחל עם עוברי דג זברה מורדמים שהוזרקו עם חיידקים פתוגניים עם תווית פלואורסצנטית, לבד או מעורבב עם מיקרוספירות ביו-חומריות, כדי לדגמן זיהום הקשור לביו-חומר in vivo.

הניחו צלחת פטרי המכילה מדיה בסיסית עם חומר הרדמה על במת מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו המצויד במסננים מתאימים.

הוסף תמיסת מתיל צלולוז למנה ליצירת מדיום צמיג המשתק עוברים להדמיה.

העבירו עוברים בודדים לתוך המתיל צלולוז ויישרו אותם אופקית, תוך הקפדה על אתר ההזרקה גלוי.

באמצעות מסנן השדה הבהיר, התמקד באתר ההזרקה כדי למקד את האזור הנגוע.

הגדר את פרמטרי ההדמיה של Z-stack ורכוש תמונות פלואורסצנטיות בעומקים שונים כדי ללכוד דינמיקת זיהום בתלת מימד.

באמצעות תוכנה, נתח את התמונות שצולמו לאורך זמן כדי לכמת את עוצמת הקרינה ולנטר את התפלגות החיידקים.

פרוטוקול זה מאפשר השוואה ישירה של התקדמות הזיהום בעוברים חיים עם ובלי חשיפה לביו-חומרים.

מניחים צלחת פטרי בגודל 100 מילימטר המכילה מדיום E3 בתוספת 0.02% טריקאין על במת מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו, ומוסיפים 500 מיקרוליטר של 2% מתיל צלולוז לתוך צלחת הפטרי. כדי לעקוב אחר התקדמות ההדבקה על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ציידו את מסנני השדה הבהיר והפלואורסצנטי המתאימים, יישרו את העוברים הנגועים המורדמים אופקית בנקודה של מתיל צלולוז בצלחת פטרי.

השתמש במסנן השדה הבהיר כדי להביא את הרקמה המוזרקת הפגועה למיקוד בהגדלה של פי 160. הגדר את עומק מחסנית ה-Z ל-10 מיקרומטר ואת גודל הצעד לחמישה מיקרומטר כדי לאפשר הקלטה של שלוש תמונות עוקבות. לאחר מכן דמיין את העוברים הבודדים תחת הגדרות אופטימליות זהות בהגדלה של פי 160.

השתמש בתוסף ObjectJ ב-ImageJ כדי לנתח את התמונות.