JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:12 דק' • September 26th, 2025
התחל בצלחת המכילה תא אגרוז מעוצב בחריצים.
כל חריץ מכיל עוברי דג זברה מורדמים שקועים במדיום עוברי בתוספת חומר הרדמה.
תחת מיקרוסקופ אור, הכנס מחט מיקרו-הזרקה לרקמת השריר.
הזריק תרחיף המכיל מיקרוספירות S. aureus ופוליסטירן כדי לדגמן זיהום הקשור לשתל.
מעבירים את העוברים המוזרקים לבארות בודדות של צלחת מרובת בארות מלאה במדיום טרי ודוגרים.
מיקרוספירות מציעות משטח פיזי התומך בהתיישבות חיידקים ומקדם זיהום.
כדי להעריך זיהום חיידקי הקשור לשתל, העבירו כל עובר לצינור נפרד ושטפו אותו עם חוצץ. הוסף חרוזי חיץ וקרמיקה.
הומוגניזציה כדי ליז את העוברים ולשחרר תוכן פנימי, כולל חיידקים.
צלחת את ההומוגנטים המדוללים, ואז דגירה כדי לאפשר היווצרות מושבה.
עוברים שהוזרקו עם תרחיף המיקרוספרה-חיידקים מראים ספירת מושבות גבוהה יותר מאלה שהוזרקו עם תרחיף החיידקים בלבד. זה מצביע על כך שהמיקרוספירות מגבירות את הרגישות לזיהום.
לאחר המתנה של חמש דקות להרדמת העוברים, יישר את העוברים בתוך החריצים בכיוון אחד להזרקתם. כוונו את המיקרו-מזרק להגדרות ההזרקה המתאימות, והכניסו את המחט לרקמת השריר של העובר הראשון בזווית של 45 עד 60 מעלות תחת מיקרוסקופ סטריאו.
הזז בעדינות את המחט קדימה ואחורה כדי להתאים את המיקום בתוך הרקמה לפי הצורך, והשתמש בדוושת הרגל של המיקרו-מזרק כדי להזריק את המתלה הטעון. בעת הזרקת תרחיף מיקרוספרה חיידקית לרקמה של עוברי דג הזברה, יש להחדיר את המחט בעדינות אך ביד יציבה. לאחר החדרה מוצלחת, יש ליצור מקום לחומרים לפני ההזרקה.
ולשמור על העוברים במדיום E3 ללא טריקאין בבארות בודדות של צלחות של 48 בארות עם שינויים יומיים במדיום. כדי לעקוב אחר התקדמות ההדבקה על ידי כימות יחידה יוצרת מושבה, העבירו באופן אקראי חמישה עד שישה עוברים נגועים ברי קיימא למיקרו-צינורות בודדים של שני מיליליטר זמן קצר לאחר ההזרקה, ושטפו בעדינות את העוברים עם PBS סטרילי. לאחר השלכת השטיפות, הוסיפו 100 מיקרוליטר PBS סטרילי לכל צינור, ואחריהם שניים עד שלושה חרוזי זירקוניה סטריליים בקוטר שני מילימטרים.
לאחר מכן מועכים את העוברים בהומוגנייזר ב-3,500 סל"ד למשך 30 שניות, ומתרביים את ההומוגנאט כפי שהודגם.