הדמיית זמן-lapse פלואורסצנטית של מחזור החיים של Streptomyces venezuelae

קח צלחת מיקרופלואידית עם באר המכילה נבגים של Streptomyces venezuelae, חיידק היוצר קורים.

בארות ייעודיות אחרות מכילות מדיום עשיר בחומרים מזינים או מבוזבז.

הנבגים נגזרים מזן המבטא חלבוני DivIVA ו-FtsZ פלואורסצנטיים, המתמקמים בקצות ההיפים ובקירות צולבים, בהתאמה.

מרחו שמן טבילה על עדשת האובייקט של מיקרוסקופ הפוך ועל חלון ההדמיה של הצלחת.

התקן את הצלחת על שלב המיקרוסקופ והתחל בהדמיית זמן-lapse.

טען את הנבגים לתא התרבות של הצלחת.

לאחר מכן, הכניסו את המדיום העשיר בחומרים מזינים כדי להתחיל נביטת נבגים.

ככל שהקורים גדלים, DivIVA מצטבר בקצות הקור, בעוד ש-FtsZ יוצר טבעות מפוזרות בקירות הצולבים.

לאחר מכן, עבור למדיום המושקע. המחסור בחומרים מזינים במדיום זה תומך בנבגים.

בהנבטת קורים, מוקדי DivIVA נעלמים, ו-FtsZ מתארגן מחדש לסולם רגיל של טבעות חלוקה, ויוצר מחיצות נבגים.

עם הזמן, היעלמות הקרינה של FtsZ באותם קורים מאשרת את השלמת הנבגים.

מחממים מראש את החדר הסביבתי ל -30 מעלות צלזיוס מראש.

לאחר מכן הפעל את המיקרוסקופ ואת תוכנת בקרת המיקרוסקופ. שים יעד טבילה בשמן עם צמצם מספרי גבוה ואשר כי המסננים המתאימים והמראות הדיאגרמטיות המוגדרים לרכישת תמונות ניגודיות של הפרעות דיפרנציאליות, יחד עם התמונות של היתוך החלבון הפלואורסצנטי הצהוב והאדום נמצאים במקום. הנח טיפה של שמן טבילה לתוך המטרה ולתחתית חלון ההדמיה גם על ה