JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:55 דק' • September 26th, 2025
התחל עם מדיום אגר מותך התומך בצמיחת חיידקים.
הוסף כלאטור ברזל כדי לרוקן ברזל חופשי, והשלם את המדיום בסידן.
שופכים את המדיום לתבשיל, מניחים לו להתמצק ואז מייבשים אותו כדי למנוע לחות שיורית.
קחו תרבית מרק של Vibrio parahaemolyticus, חיידק מולקה.
במדיה נוזלית, החיידקים קיימים בצורת שחיין קצר בצורת מוט עם שוט.
זהה את התרבית על הצלחת ואפשר לה להתייבש כדי לקדם מגע חיידקי עם פני השטח.
אוטמים את המנה ודוגרים, ומאפשרים לתוצרי לוואי מטבוליים נדיפים מהחיידקים להצטבר.
מגע עם פני השטח, הגבלת ברזל, זמינות סידן ותוצרי לוואי מצטברים גורמים לביטוי גנים, מה שמפעיל את ההתמיינות לתאי נחיל מוארכים המכילים דגלים לרוחב, המאפשרים תנועה על פני משטחים מוצקים.
תאי הנחיל מתרחבים החוצה ויוצרים התפרצויות נחיל המורכבות מתאים ממוינים לחלוטין, מה שמעיד על התמיינות מוצלחת.
כדי להכין את תמיסת האגר להכנת צלחות נחילים, יש להשעות ארבעה גרם עירוי לב, או אבקת אגר H. I. ו-100 מיליליטר מים מזוקקים כפולים.
מרתיחים בזהירות את תמיסת ה- H. I. agar במיקרוגל, מנערים את הבקבוק מדי פעם עד להמסת האבקה. חיטוי תמיסת האגר בחום של 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות, מצננים את תמיסת האגר ל 60 עד 65 מעלות צלזיוס תוך ערבוב מתמיד. השלב הבא כולל טיפול ב-2, 2'-Bipyridyl, שהוא רעיל מאוד, ולכן יש ללבוש כפפות ומשקפי מגן.
הוסף 2, 2'-Bipyridyl לריכוז סופי של 50 מיקרומולר. הוסף סידן כלורי לריכוז סופי של ארבע מילימולר. יש לחסן כמות קטנה של תאי V. parahaemolyticus מקצה מושבה בודדת לתוך 5 מיליליטר של מרק LB.
דגרו את התרבית ב-37 מעלות צלזיוס בחממת שייקר עד שהיא מגיעה לצפיפות אופטית של 600 ננומטר של 0.8. זה בדרך כלל לוקח כשעתיים-שלוש. בזמן שתרבית התאים גדלה, פיפטה 30 עד 35 מיליליטר מתמיסת האגר הסופית של H. I. לתוך צלחת פטרי עגולה של 150 מילימטר, ותנו לאגר להתמצק.
ממש לפני שמבחינים בתרבית התאים, יש לייבש את צלחת האגר זקופה עם מכסה פתוח בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות לפחות, או עד שנעלמו שאריות נוזלים, אך לא עוד. אתר מיקרוליטר אחד של תרבית תאים במרכז צלחת נחיל האגר H. I. agar ותן לנקודה להתייבש. אטום את הצלחת בעזרת סרט פלסטיק שקוף, הקפד למנוע היווצרות בועות אוויר וקפלים לקלטת.
דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 24 מעלות צלזיוס למשך הלילה. זה יביא להיווצרות מושבת נחיל V. parahaemolyticus עם התפרצויות נחיל המשתרעות ממרכז המושבה, כפי שמוצג בסרטון דולג זמן זה.
מחקר זה בוחן את הדיפרנציאציה של Vibrio parahaemolyticus לתאי swarmer תחת תנאים סביבתיים ספציפיים. התהליך כולל מניפולציה של רכיבי מצע האגר ותנאי אינקובציה כדי לעודד צמיחה ותנועה של חיידקים.
השראה של דיפרנציאציה של Vibrio parahaemolyticus לתאי swarmer מאפשרת בחינה מדויקת של מנגנוני הסתגלות וניידות חיידקית, שהם קריטיים להבנת התנהגות מיקרוביאלית במערכות רלוונטיות למחלה. זרימת עבודה זו תומכת בתיקוף מטרות בשלב מוקדם ובצמצום סיכונים מכניסטיים עבור אסטרטגיות אנטי-וירולנטיות ואנטי-ביופילם בפורטפוליו של מחלות זיהומיות. הגישה מספקת פלטפורמה ניתנת לשחזור להערכת טריגרים סביבתיים ושינויים בביטוי גנים העומדים בבסיס פנוטיפים חיידקיים.
שיטה זו משתלבת ברצף הגילוי, החל מבדיקת השערות ראשונית, דרך פיתוח בדיקות ועד להתאמה של מודלים פרה-קליניים למחקר של מחלות זיהומיות.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026