בידוד מושבת חיידקים ממוקד באמצעות פירוק הידרוג'ל בדוגמת אור

קח כיסוי עם שכבת הידרוג'ל מתכלה המכילה מושבות חיידקים כלואות, מהונדסות גנטית כדי לפלוט פלואורסצנטיות.

הנח את הכיסוי לתוך מחזיק.

הוסף מדיה כדי למנוע התייבשות דגימה.

תחת מיקרוסקופ שדה בהיר, התמקדו במושבה אחת מעניינת.

באמצעות תוכנה מתאימה, תכנן דפוס אור למיצוי תאים בפריפריה של המושבה כדי לפרק את הקשרים המבניים של ההידרוג'ל ולמזער את החשיפה ל-UV לתאים.

התאם את עוצמת אור ה-UV ומשך החשיפה.

יזום חשיפה לאור UV כדי לשבור את הקשרים המבניים בהידרוג'ל באזורים החשופים המאפשרים את שחרור מושבת המטרה.

בעזרת מסנן פלואורסצנטי, זהה את המושבה.

הניחו קצה צינור במקום, כשהקצה השני מחובר למזרק.

עבור למצב שדה בהיר, ובעזרת המזרק, שאב את המושבה המשוחררת.

העבירו את המושבה לצינור להמשך ניתוח.

הנח את הדגימה במחזיק PDMS והוסף את המדיה המוגדרת על גבי הדגימה כדי למנוע התייבשות דגימה ולספק פתרון נשא לתאים משוחררים. לאחר הבאת מראת הכיול למקומה, כוונן את מיקוד המיקרוסקופ כדי לקבל תמונה חדה של המושבות בתוך מערך ההידרוג'ל או המיקרובאר ובדוק כדי לזהות מושבות או בארות מעניינות.

כאן, עצב את דפוסי האור בזמן שתצוגת המצלמה מציגה את המושבות בתוך הדגימה כדי לבדוק דפוסים שונים לחילוץ תאים ולשמור את הדפוס שהוגדר. לאחר מכן בחר את מקטע בקרת ההפעלה, הוסף את הרצף השמור תחת הכרטיסיה שכותרתה עם שם המוצר של כלי התאורה המעוצב. בחר באפשרות לגירוי הדפוס כדי view ולהתאים את מיקום החשיפה הרצוי.

לאחר מכן, כוונן את עוצמת האור ל-60% ואת זמן החשיפה ל-40 שניות תחת לשונית בקרת LED והתחל בתהליך החשיפה. עקוב אחר פירוק ההידרוג'ל בזמן אמת ובמצב Brightfield כדי להבטיח את שחרור התא. כדי לאסוף את התא המשוחרר, שנה את מסנן המיקרוסקופ מ-Brightfield ל-TRITC כדי לדמיין את האזור החשוף של הדגימה בעין בלתי.

לאחר איתור האזור החשוף, הנח את קצה הצינור על הנקודה המוקרנת, ולאחר מכן החלף את מסנן המיקרוסקופ בחזרה לברייטפילד כדי לנטר את אחזור התאים בזמן אמת. השתמש במזרק המחובר לקצה השני של הצינור כדי למשוך בזהירות 200 מיקרוליטר של תמיסה המכילה את התאים המשוחררים ולהעביר את התמיסה לצינור צנטריפוגה בגודל 1.5 מילימטר לניתוח DNA או ציפוי