מידול קולוניזציה של נרתיק עכברים על ידי חיידקים אנאירוביים

קחו למשל עכברה שטופלה בהורמון שמרכך את סביבת הנרתיק, ומגביר את הרגישות שלה לזיהום.

הרם את העכבר בזנבו בזמן שהוא אוחז בכלוב בכפות רגליו הקדמיות כדי להרים את הרבעים האחוריים ולחשוף את פתח הנרתיק.

שטפו את לומן הנרתיק עם חיץ אנאירובי כדי לשטוף ריר, מחסום מגן מפני פתוגנים, יחד עם תאי אפיתל מתים וחיידקי נרתיק אנדוגניים.

חסנו מיד את הנרתיק בתרחיף של פתוגן חיידקי אנאירובי, תוך שמירה על ריסון העכבר כדי למזער את אובדן הנוזלים.

לחיסון משותף, יש לתת תרחיף של פתוגן חיידקי אנאירובי אחר באותו נפח כמו קודם.

שכן את העכבר המחוסן בנפרד מעכברים לא מחוסנים כדי למנוע זיהום צולב.

לאחר החיסון, החיידקים נצמדים לאפיתל הנרתיק, גדלים למושבות ומפתחים שכבת ביופילם מגנה המשמשת כמחסום נגד תגובות חיסוניות של המארח.

הכן את צינורות שטיפת הנרתיק בתא האנאירובי על ידי פיפטינג של 70 מיקרוליטר של PBS אנאירובי סטרילי לצינורות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המסומנים במספרי עכבר.

סגור את הצינורות בחוזקה והוציא אותם מהחדר. לביצוע שטיפת נרתיק, ראשית, הניחו עכבר על גבי כלוב שהוא יכול לתפוס בכפות רגליו הקדמיות. לאחר מכן, אחזו בעדינות בחלק האמצעי של הזנב והרימו אותו כך שהרבעים האחוריים יהיו מוגבהים מעט ופתח הנרתיק ייחשף.

לאחר שאיבת 50 מיקרוליטר PBS מצינור הכביסה המסומן, הכנס בעדינות את קצה הפיפטה שניים עד שלושה מילימטרים לתוך לומן הנרתיק כדי לשטוף אותו עם PBS על ידי פיפטינג פנימה והחוצה שלוש עד ארבע פעמים. לאחר מכן, העבירו את חומר הכביסה בחזרה לצינור הכביסה המקורי עם 20 המיקרוליטרים הנותרים של PBS שאינם בשימוש. מיד לאחר שטיפת הנרתיק הזו, חסנו כל עכבר על ידי העברה נרתיקית של 20 מיקרוליטר של מתלה החיידקים או בקרת הרכב.

לניסויי חיסון משותף עם שני זני חיידקים שונים, יש לחסן בנפרד ב-10 מיקרוליטר מכל תרחיף חיידקים, במקום לערבב את הזנים לפני כן. כדי למנוע מהנפח הניתן להצטבר מיד בכניסה לנרתיק, המשך להחזיק את החלק האחורי של העכבר למשך 10 עד 20 שניות. העבירו את העכבר המחוסן לכלוב חדש או עם חברים לכלוב שכבר חוסנו, וחזרו על ההליך עם העכברים האחרים.