אספקה מקומית של חיידקים ללומן המעי של זחל דג זברה באמצעות מיקרו-הזרקה

קח מנה המכילה זחל דג זברה מורדם.

מרחו טיפה של אגרוז נמס נמוך על הזחל ומקמו אותו בעדינות לרוחב כדי לאפשר גישה למעי במהלך ההזרקה.

כעת, יש לקרר לזמן קצר את האגרוז כדי למצק אותו, ובכך לשתק את הזחל.

הוסף חומר המכיל חומר הרדמה כדי לשמור על הזחל בהרדמה.

לאחר מכן, קח תרחיף של Clostridioides difficile, חיידק פתוגני, והוסף צבע עוקב כדי להקל על ניטור ההזרקה.

טען את התערובת הזו למחט מיקרו-הזרקה והרכיב את המחט על מיקרומניפולטור.

תחת סטריאומיקרוסקופ, מקם את המחט בזווית המכוונת לכיוון מעי הזחל.

לאחר מכן, הכנס בעדינות את קצה המחט לתוך לומן המעי.

הזרקו את החיידקים ישירות ללומן ואשרו אספקה מוצלחת באמצעות צבע המעקב. לאחר מכן, משוך את המחט.

באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, אשר את הלוקליזציה של Clostridioides difficile במעי הזחל.

ראשית, הניחו טיפה של 0.8% אגרוז נמס נמוך על זחלי דג הזברה בצלחת פטרי לכיסוי. התאם בעדינות את הזחלים למצב רוחבי. מניחים את צלחת הפטרי על קרח למשך 30 עד 60 שניות כדי לאפשר לאגרוז הנמס להתמצק.

הוסף 30% מדיום של Danieau המכיל 0.02% עד 0.04% טריקאין כדי לכסות את האגרוז. להכנת תמיסת הזרקה, הוסף מיקרוליטר אחד של 0.5% פנול אדום בתמיסת PBS לתשעה מיקרוליטרים של חיסון Clostridioides difficile המוכתם בצבע. טען מחט מיקרו-הזרקה מכוילת עם תמיסת ההזרקה באמצעות Microloader.

התקן את המחט הטעונה למיקרומניפולטור, ומקם אותה מתחת למיקרוסקופ סטריאו. כוונן את לחץ ההזרקה בין 600 ל-900 הקטופסקלים. הגדר את זמן ההזרקה ל-0.1 עד 0.3 שניות כדי לקבל 0.5 עד 1.0 ננו-ליטר.

הנח את המחט במיקרומניפולטור בזווית של כ-45 מעלות, והצביע לעבר הזחלים המוטבעים. הנח את קצה המחט מעל מערכת העיכול, קרוב לנקבוביות האורוגניטליות. חודרים דרך האגרוז, ואז את השריר עם קצה המחט.

לאחר מכן הכנס אותו ללומן המעי, והזריק 0.5 עד 1.0 ננוליטר של Clostridioides difficile. השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לנטר את הזחלים המוזרקים, והשתמש בקצה מיקרו-מטען גמיש כדי לאסוף את הזחלים שהוזרקו כהלכה להדמיה קונפוקלית.