אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:28 דק׳ • September 26th, 2025
התחל עם זחל דג זברה שעבר המתת חסד עם מעי נגוע ב-Clostridioides difficile, חיידק אנאירובי פתוגני.
אבטח את תא המטען הגבי העליון של הזחל והסר את ראשו כדי לחשוף את האיברים הפנימיים.
אבטח את תא המטען הגבי האמצעי ובודד בעדינות את המעי מחלל הגוף.
העבירו את המעי המבודד לצינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל חיץ.
הומוגניזציה של המעי באמצעות עלי כדי לשבש את הרקמה ולשחרר את חיידקי המעי.
העבירו את ההומוגנאט לתוך צינור המכיל אמצעי גידול סלקטיביים בתוספת אנטיביוטיקה.
דגרו את ההומוגנט בתא אנאירובי.
תנאים אנאירוביים מעכבים את הצמיחה של חיידקים אירוביים, בעוד שאנטיביוטיקה מכוונת ומדכאת באופן ספציפי את הצמיחה של חיידקי מעיים אנאירוביים מקומיים.
קלוסטרידיואידס דיפיצילה מתנגד לאנטיביוטיקה זו ומתפשט בתנאים אנאירוביים.
חומרים מזינים וגורמי גדילה באמצעי הגידול מקדמים עוד יותר את חלוקת התאים, ומאפשרים צמיחה של קלוסטרידיואידס דיפיצילה בת קיימא.
לאחר המתת חסד של זחלי דג הזברה הנגועים, הכנס מחט לתוך תא המטען הגבי של זחלי דג הזברה קרוב לראש כדי לשתק את דג הזברה. הסר את הראש מאחורי הזימים בעזרת רומח.
הכנס מחט שנייה לאמצע תא המטען הגב. הכנס מחט שלישית לבטן של דג הזברה, ומשוך את המעי החוצה מחלל הגוף. השתמש במחט מיקרו-הזרקה כדי להעביר 10 עד 15 מעיים לתוך צינור של 1.5 מיליליטר המכיל 200 מיקרוליטר של PBS סטרילי 1X.
הומוגניזציה של המעיים בעזרת עלי כדי לשבש את הרקמה ולהכין הומוגנטים. ודא שהעלי מגיע לתחתית הצינור כדי לשבש את כל המעיים לחלוטין. לתוך ההומוגנטים, הוסיפו מדיום גידול Clostridioides difficile המכיל D-cycloserine ו-cefoxitin, עם או בלי טאורוכולאט, ודגרו בתא אנאירובי.