זיהוי תפוקה גבוהה של פולימרים דוחי חיידקים באמצעות סינון מיקרו-מערך

הנח שקופית מיקרו-מערך מעוקרת ומצופה אגרוז עם כתמי פולימר מרובים לתוך צלחת מרובת בארות. האגרוז ממזער קשירת חיידקים לא ספציפיים.

הוסף לשקופית תרבית חיידקים מעורבת ודגר אותה בתסיסה עדינה.

חיידקים מפרישים חלבוני הידבקות מובהקים הנקשרים לכתמים פולימריים חיוביים, וכתוצאה מכך התקשרות חיידקית חזקה יותר והתיישבות לאורך זמן.

לעומת זאת, פולימרים דוחים מתנגדים לספיגת חלבון ומפחיתים את התקשרות החיידקים.

שטפו את השקופית עם מי מלח עם חוצץ פוספט או PBS כדי להסיר חיידקים קשורים באופן רופף.

הוסף DAPI כדי לצבוע את ה-DNA של חיידקים המחוברים לפני השטח.

שטפו את השקופית עם PBS, יבשו אותה ואטמו אותה עם כיסוי דבק.

עקר את משטח ההחלקה החיצוני באתנול.

צלם תמונות שדה בהיר כדי לאתר את כתמי הפולימר. לאחר מכן, עבור למצב פלואורסצנטי כדי לזהות את הקרינה על כתמי הפולימר.

כתמים פולימריים המציגים פלואורסצנטיות מופחתת מצביעים על התקשרות חיידקית מינימלית ומזוהים כפולימרים דוחי חיידקים.

לאחר תרבית והכנת חיסון למיקרו-מערכים, על פי פרוטוקול הטקסט, הנח את המיקרו-מערכי הפולימר המעוקר UV בצלחות מלבניות של ארבע בארות והוסף שישה מיליליטר של תרביות חיידקים מעורבות. דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתסיסה עדינה למשך חמישה ימים. לאחר הדגירה, השתמש ב-PBS כדי לשטוף בעדינות את המיקרו-מערכים פעמיים.

לאחר מכן הוסף מיקרוגרם אחד למיליליטר DAPI ב-PBS ודגר למשך 30 דקות. לאחר מכן, העבירו את המיקרו-מערכים לצלחת טרייה של ארבע בארות, כסו את המיקרו-מערכים ב-PBS ואז סובבו בעדינות. לאחר מכן החלף את ה-PBS פעם אחת וחזור על הכביסה.

לאחר השטיפה, יבש את המיקרו-מערכים תחת זרימת אוויר ולאחר מכן מרח סרט איטום והצמד החלקות כיסוי זכוכית על שקופיות המיקרו-מערך. כאשר הדבק יבש, השתמש באתנול 70% כדי לעקר את המשטח החיצוני. באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, המצויד בסובייקטיבי פי 20, צלם תמונות בודדות עבור כל נקודת פולימר בערוצי שדה בהיר ו-DAPI.