הכנת Bioluminescent Enterohemorrhagic Escherichia coli Inoculum
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:11 דק׳ • September 26th, 2025
התחל עם מלאי קפוא של Escherichia coli או EHEC, חיידק מעיים פתוגני.
חיידקים אלה נושאים פלסמיד המבטא לוציפראז להדמיה ביולוגית בזמן אמת וגן עמידות לאנטיביוטיקה לבחירה.
פס את החיידקים על צלחת אגר המכילה את האנטיביוטיקה המתאימה ודגירה כדי לבודד מושבות בודדות נושאות פלסמיד.
בחרו מושבה אחת ותרבו אותה בציר עם תוסף אנטיביוטיקה. דגירה כדי להפיץ אוכלוסייה אחידה גנטית ויציבה בפלסמיד.
הרחב את התרבית בתנאים מאווררים כדי לסנכרן תאים בצמיחה לוגריתמית.
עקוב אחר צמיחת החיידקים עד להגעה לצפיפות האופטית הרצויה.
לאחר מכן, צנטריפוגה את התרבות כדי לגלול את החיידקים.
הסר את הסופרנטנט ושטוף את הכדור במי מלח סטריליים.
שוב צנטריפוגה. השליכו את הסופרנטנט והשעו את הכדור בנפח קטן יותר של מי מלח.
מתלה EHEC מרוכז זה מוכן כעת למעקב מבוסס ביולומינסנציה.
כדי להתחיל, פס מלאי שלילי של 80 מעלות צלזיוס של חיידקי E.coli O157 H7 EDL933 המכיל פלסמיד לוציפראז על צלחת אגר LB עם 50 מיקרוגרם למיליליטר קנמיצין. גדל את החיידקים במשך 16 עד 18 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. בחר מושבה אחת מצלחת הלילה וחסן שלושה מיליליטר של מדיום LB ב -50 מיקרוגרם למיליליטר קנמיצין.
לאחר מכן, דגרו את התרבית ב-37 מעלות צלזיוס ו-220 סל"ד למשך 16 עד 18 שעות. למחרת, הכינו 2 מיליליטר של דילול של 1 עד 100 של תרבית הלילה וחיסנו אותו ל -200 מיליליטר LB עם קנמיצין.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים