הכנת ספרופלסט E. coli
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 4:30 דק׳ • September 26th, 2025
קחו לדוגמה תרבית של אי קולי .
לדלל את התרבות במדיה טרייה ולדגור אותה כדי לקדם חלוקת חיידקים.
לאחר מכן, יש לדלל את התרבית במדיה המכילה מעכב חלוקת חיידקים ולדגור.
החיידקים ממשיכים לגדול מבלי להתחלק, ויוצרים חוטים מוארכים.
העבירו את התרבית לצינור טרי, ואז צנטריפוגה כדי לגלול את החוטים ולהסיר את הסופרנטנט.
שטפו את הגלולה עם מייצב אוסמוטי למניעת ליזה של ספרופלסט. הסר את הפתרון.
הוסף חוצץ, ליזוזים, DNase וחומר כלאט ברצף. דגירה.
חומר הקלאט מערער את יציבות הממברנה החיצונית של הנימה.
ליזוזים משפיל את שכבת הפפטידוגליקן החשופה, וגורם לחוטים לאבד צורה וליצור מבנים כדוריים הנקראים ספרופלסטים.
בנוסף, DNase משפיל DNA מזהם המשתחרר מחוטים פגומים.
מוסיפים שוב את המייצב האוסמוטי, מערבבים ודוגרים.
העבירו את המתלה לצינור המכיל חיץ וצנטריפוגה.
הסר עודף סופרנטנט והשהה מחדש את הספרופלסטים במאגר לניתוח במורד הזרם.
כדי להקים תרבית לילה, השתמש בקצה מיקרופיפטה סטרילי כדי להעביר מושבת חיידקים בודדת מצלחת תרבית אגר מוצקה לצינור תרבית של 14 מיליליטר, המכיל שניים עד שלושה מיליליטר של מרק סויה טריפטיקז של שלושה אחוזים, TSB, למשך דגירה של 16 עד 21 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם טלטול. להכנת ספרופלסטים גראם שליליים של E. coli , יש לדלל את תרבית הלילה ביחס של 1 ל-100, ו-25 מיליליטר TSB בבקבוק של 250 מיליליטר, ולהחזיר את החי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים