יצירת פרוטופלסטים מהחיידק הגרם חיובי Bacillus megaterium
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:13 דק׳ • September 26th, 2025
קחו תרבית של Bacillus megaterium, חיידק גרם חיובי.
לדלל את התרבות במדיה טרייה ולדגור אותה בניעור כדי לקדם חלוקת חיידקים.
העבירו את התרבית לצינור ולצנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים.
הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הגלולה במדיה המכילה מייצבים אוסמוטיים כדי למנוע ליזה של פרוטופלסט.
מעבירים את התמיסה המושעה לבקבוק, מוסיפים ליזוזים ודוגרים בניעור.
במהלך הדגירה, ליזוזים משפיל את דופן התא הפפטידוגליקן העבה של החיידק.
כאשר דופן התא מתכלה, החיידקים משתנים מצורה בצורת מוט לגופים כדוריים המוגבלים רק על ידי קרום הפלזמה, ויוצרים פרוטופלסטים.
דמיין את המתלה תחת מיקרוסקופ.
החיידקים העגולים מאשרים היווצרות פרוטופלסט, בעוד שהחיידקים הנפוחים בצורת מוט מעידים על עיכול לא שלם.
העבירו את התמיסה לצינור ולצנטריפוגה כדי לגלול את הפרוטופלסטים.
הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הפרוטופלסטים במדיה טרייה המכילה מייצבים אוסמוטיים להמשך ניתוח.
להכנת פרוטופלסטים גראם חיוביים של B. megaterium , יש לדלל את תרבית החיידקים הלילה ביחס של 1 ל-1000 ב-100 מיליליטר של שלושה אחוז TSB בבקבוק של 250 מיליליטר לדגירה של 4.5 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול. כאשר התרבית הנוזלית מגיעה לצפיפות אופטית של 0.9 עד 1.0 ב-600 ננומטר, פצלו את החיידקים בין שני צינורות חרוטיים של 50 מיליליטר לצנטריפוגה שלהם, והשתמשו בפיפטה סירולוגית כדי לשאוב את הסופרנטנ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים