הכנה ואינדוקציה של תרביות Borrelia burgdorferi לייצור חלקיקים נגיפיים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:17 דק׳ • September 26th, 2025
התחל בתרבית של זן מהונדס גנטית של Borrelia burgdorferi, חיידק פתוגני.
זן זה נושא DNA בקטריופאג'י רדום המשולב בגנום שלו, אשר הונדס לכלול גן מטרה המעניק עמידות לאנטיביוטיקה.
הוסף את האנטיביוטיקה המתאימה ודגר את התרבות. הגן העמיד לאנטיביוטיקה מבטא חלבון המעכב את האנטיביוטיקה, ומבטיח שרק חיידקים המכילים את הגן יתרבו.
ברגע שהתרבית מגיעה לצפיפות הרצויה, צנטריפוגה את התאים כדי לגלול אותם ולהשליך את הסופרנטנט.
השעו מחדש את הגלולה, הכניסו גורם כימי ודגרו כדי לגרום נזק ל-DNA.
תגובת תיקון ה-DNA המתקבלת כורתת את ה-DNA של הבקטריופאג'ים, יוזמת את שכפולו, ביטוי חלבונים מבניים והרכבה של נגיפים חדשים הנושאים את הגן העמיד לאנטיביוטיקה.
צנטריפוגה שוב של התרבית, השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים במדיום טרי.
תאי החיידקים המכילים נגיפים בוגרים מוכנים ליישומים נוספים במורד הזרם.
חסנו 150 מיקרוליטר של שיבוט Borrelia burgdorferi המתאים לתוך 15 מיליליטר של BSK בצינורות צנטריפוגה חרוטיים סטריליים עם מכסה הדוק לפרוטוקול ההתמרה. לאחר מכן, יש להשלים את המדיום בריכוז מתאים של אנטיביוטיקה או שילוב של אנטיביוטיקה לבחירה ותחזוקה של DNA הטרולוגי בתוך שיבוט Borrelia burgdorferi ולדגור את הדגימה ב-33 מעלות צלזיוס. לאחר שהתרבות גדלה, צנטריפוגה את נפח התרבות המתאים ב 6,000 גרם למשך 10 דקות.
לאחר סילוק הסופרנטנט, השעו מחדש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים