השוואה פנוטיפית של זנים פראיים ומוטנטיים של Streptomyces coelicolor

התחל עם תרביות של זנים פראיים ומוטנטיים של Streptomyces coelicolor, חיידק אדמה חוטיים.

הזנים המוטנטיים נושאים מוטציות בגנים התפתחותיים הגורמים להבדלים פנוטיפיים מהסוג הפראי.

תרבית מחדש של המושבות על צלחות טריות כדי למזער הצטברות של מוטציות ספונטניות עם הגיל.

פס מושבות בודדות של הזנים על אזורים נפרדים של צלחת בתבנית טריז כדי למנוע זיהום צולב

דגרו על הצלחת כדי לקדם צמיחת חיידקים.

זנים מסוג פרא יוצרים חוטי אוויר המתפתחים לשרשראות ארוכות של נבגים בעלי פיגמנט אפור, ומעניקים למושבות מראה מטושטש.

לעומת זאת, זנים מוטנטיים אינם מצליחים לפתח חוטים אוויריים, וכתוצאה מכך מראה קירח, או מייצרים פחות נבגים פיגמנטיים, מה שגורם לחוטי האוויר להיראות לבנים.

הניחו את צלחת הפטרי על רקע אחיד כדי להמחיש את המורפולוגיה של המושבה.

צלם תמונות כדי להשוות חזותית את ההבדלים הפנוטיפיים בין הזנים מסוג הבר לזנים המוטנטיים.

השתמש בשיטה סטנדרטית, כגון שיטת הפס הרביע שהודגמה ב-Saunders 2012 כדי לפספס זני Streptomyces על לוחות אגר MS ותרבית למושבות בודדות.

כל ארבעה עד שישה ימים, בחרו מושבה אחת והניחו אותה מחדש על צלחת טרייה. ככל שהמושבות מזדקנות, הן הופכות מועדות למוטציות אקראיות. לאחר ביצוע מוטגנזה על פי פרוטוקול הטקסט, שימו לב למורפולוגיה של המושבה עבור כל מוטאנט בהשוואה לזן ההורים מסוג הבר.

בעת אפיון מיני Streptomyces חדשים, השווה את הבודד החדש לזה של מין שנחקר היטב תוך ציון הצורה הבסיסית, פני השטח של המושבה, האטימות, הגובה והפיגמנטציה. סמן צלחת אגר MS ופס זנים מסוג פרא ומוטנטי בדפוסי טריז. היזהר שאף זן לא ייגע בזן אחר כדי למנוע זיהום צולב.

שימו לב לתאריך ולשעה שבהם הזנים מפוספסים על הצלחת. לאחר מכן דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס. זכרו, חשוב ביותר להגן תמיד על דגימת הסטרפטומיצס שלכם מפני זיהום, השתמשו בטכניקה הסטרילית הטובה ביותר שלכם לכל שלבי פתיחת הצלחות והצינורות למשך הזמן הקצר ביותר האפשרי.

מניחים צלחות פטרי מגודלות על נייר צבעוני או לבן כדי להפוך את הרקע להומוגניזציה. כתוב על הנייר את שם הזן, התאריך, טמפרטורת הדגירה והשעה מהפסים של הצלחת הראשונה.

צלם תמונות דיגיטליות של הצלחת עם מידע המתח כתוב על רקע הנייר כך שהבלבול יהיה מינימלי.