מיקרוסקופ ניגוד פאזה להערכת מוטציות התפתחותיות בסטרפטומיצס

התחל עם לוחות אגר המכילים מושבות של זנים פראיים ומוטנטיים של Streptomyces coelicolor, חיידק אדמה נימי.

הנח כיסוי סטרילי על אזור של צמיחת מושבה צפופה שבו חוטי אוויר, שהם חוטים המשתרעים מעל פני המושבה, נראים בבירור.

לחץ בעדינות על החלקת הכיסוי כדי להעביר את חוטי האוויר והנבגים הנלווים אל משטח הכיסוי.

לאחר מכן, קח שקופית מיקרוסקופ עם אמצעי הרכבה והתקן את תא הכיסוי עם הצד כלפי מטה כדי לשמר את מבני החיידקים.

הנח את השקופית על במת מיקרוסקופ, הוסף טיפת שמן טבילה על הכיסוי ויישר את המטרה.

באמצעות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה, רכשו תמונות של חוטי האוויר מזנים פראיים ומוטנטיים כאחד.

חוטים מסוג בר מציגים נבגים בגודל אחיד ומרווחים באופן קבוע.

לעומת זאת, זנים מוטנטיים מציגים פגמים, כגון חוטים בולטים, נבגים לא סדירים או נבגים ליזים, החושפים הבדלים פנוטיפיים התפתחותיים בין הסוג הפראי למוטאנטים.

כדי להכין הרמת כיסוי של גידול חיידקים, השתמש בפינצטה סטרילית כדי להרים כיסוי סטרילי ולהניח את הכיסוי על צלחת אגר MS שבה צמיחת החיידקים צפופה. בעזרת פינצטה, לחץ בעדינות על גב הכיסוי כדי להבטיח העברה מספקת של נבגי חיידקים ותפטיר אווירי. הרם את הכיסוי מהצלחת והנח אותו בזווית של 45 מעלות כשחומר התא פונה אל פני השטח של שקופית מיקרוסקופ המכילה טיפה של 15 מיקרוליטר של 50% גליצרול.

אפשר לכיסוי ליפול על הגליצרול, מה שיפחית את בועות האוויר. כדי לבצע מיקרוסקופ ניגודיות פאזה במרווחי זמן שונים, הנח את השקופית המוכנה על שלב המיקרוסקופ והוסף טיפת שמן טבילה למרכז הכיסוי. סובב את מטרת הפאזה פי 100 במקומה והגדר את צריח המעבה להגדרת השלב התואמת המתאימה.

לאחר שעדשת האובייקט נמצאת במגע עם השמן, השתמש רק בכפתור הכוונון העדין כדי למקד את התמונה. בחנו מספר שדות ראייה כדי להבחין בהבדלים ניכרים ועקביים בין זני מוטנטים לסוג הפראי. כגון היכולת ליצור נבגים, גודל וצורת הנבגים והמספר הכולל של הנבגים.