אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:35 דק׳ • September 26th, 2025
התחל עם שקופית זכוכית מצופה בקרום נתמך המורכב מפוספוליפידים, כולל פוספוליפידים ביוטיניליים.
דגירה עם נויטרווידין, הנקשר לביוטין על השכבה הדו-שכבתית. שטפו כדי להסיר את עודפי הנויטרווידין.
הכניסו מדיום תזונתי המכיל שלפוחיות ענק או GVs. כל GV הוא שלפוחית דו-שכבתית כדורית בגודל מיקרון העוטפת תא חיידקי בודד, ומשמשת כמודל לחקר התנהגות תאים בודדים בסביבה מוגבלת.
נויטרווידין נקשר לליפידים ביוטיניליים של GV, ומאבטח את השלפוחיות לממברנה הנתמכת לתצפית יציבה וארוכת טווח בתנאים סטטיים.
אטום את החדר כדי לשמור על לחות ולמזער זיהום.
הנח את השקופית על במת מיקרוסקופ המצוידת בפלטפורמת חימום כדי לדמות תנאים פיזיולוגיים ולהתבונן במיקרוסקופ.
חומרים מזינים מהמדיום מתפזרים לתוך ה-GV כדי לתמוך בצמיחת חיידקים לאורך זמן.
הגדרה זו מאפשרת הדמיה בזמן אמת של צמיחת חיידקים חד-תאיים בתוך מיקרו-סביבות שלפוחית סגורות.
כדי לשתק שלפוחיות ענק על הממברנה הדו-שכבתית התומכת, הכניסו 10 מיקרוליטר של נויטרווידין בתמיסת שלפוחית ענקית מימית חיצונית לחור למשך 15 דקות דגירה בטמפרטורת החדר.
בתום הדגירה יש לשטוף בעדינות את החור פעמיים עם 20 מיקרוליטר מדיום LB, בתוספת גלוקוז של 200 מילימולר, ולהוסיף את כל נפח תמיסת השלפוחית הענקית לחור בתא. ואז אטום את החור עם זכוכית כיסוי בגודל 18 על 18 מילימטר. כדי לעקוב אחר צמיחת חיידקים בתוך שלפוחיות הע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים