חקירת תגובת החיידקים לאתילן באמצעות תרכובת משחררת אתילן

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה מצעי גידול מחוסנים מראש בחיידקים המייצרים תאית.

בבאר המטופלת, המדיה מתווספת עם חומצה 2-כלורו-אתילפוספונית (CEPA).

אטום את הצלחת כדי למנוע חילופי גזים ודגירה.

במהלך הדגירה, CEPA מבצע הידרוליזה ומשחרר אתילן, מולקולה גזית.

אתילן מפעיל סינתאז תאית חיידקית, המשתמש בגלוקוז UDP ציטוזולי לסינתזה של תאית.

עם הזמן, החיידקים מוציאים תאית דרך הממברנה שלהם.

זה מקדם הרכבה עצמית של חיידקים בממשק האוויר-נוזל, ויוצר ביופילם צף מבוסס תאית, או פליקל.

לאחר הדגירה, העבירו את הפליקלים לצלחת מרובת בארות טרייה. הוסף תמיסה אלקליין ודגירה בטמפרטורה גבוהה יותר כדי ליז את התאים.

הסר את התמיסה האלקליין. שטפו שוב ושוב בתסיסה כדי להסיר פסולת סלולרית תוך שמירה על התאית.

יבש ושקול את הפליקלים. משקל יבש גבוה יותר בדגימות שטופלו ב-CEPA בהשוואה לביקורת מצביע על ייצור תאית חיידקי מוגבר בתגובה לאתילן.

בדיקת הפליקל היא כלי ניתוח סטנדרטי לייצור תאית חיידקית. PH וניתוח מורפולוגי מפורטים בפרוטוקול טקסט. בהכנה, קוצרים תאים מתרביות התחלה בשלוש עותקים ומכמתים את התאים באמצעות תא ספירה של פטרוף-האוזר.

לאחר מכן, הכינו ארבע תערובות מאסטר בינוניות עם ריכוזי CEPA שונים. עבור כל תערובת מאסטר, יש להקצות 60 מיליליטר של pH 7 SH בינוני ולהוסיף 120 מיקרוליטר של תמיסת מלאי CEPA של 0, 5, 50 או 500 מילי-מולר כדי לקבל ריכוזי CEPA סופיים של 0, 0.01, 0.1 או 1.0 מילימולר. מערבבים את המדיה הזו על ידי סיבוב הצלוחיות.

יש צורך בסט אחד של מדיה עבור כל אחד מהמשולשים, ויש צורך בסט רביעי כדי לתפקד כבקרה סטרילית. אז, חלקו כל תכשיר בינוני של 60 מיליליטר לארבעה תכשירים של 14 מיליליטר. לאחר מכן, יש לקרר מראש את 14 המיליליטר לפני החיסון עם תרביות ההתחלה שלהן לריכוז סופי של 100,000 תאים למיליליטר.

שמור את כל הצינורות המחוסנים על קרח כדי למנוע ייצור תאית. השתמש ב-14 מיליליטר הנותרים עבור בארות בקרה סטריליות. כעת, מכל תערובת מאסטר של 14 מיליליטר, טען שני מיליליטר לתוך שש בארות של צלחת סטרילית של 24 בארות בסך הכל ארבע צלחות טעונות לכל תרבית מתנע שנותחה.

אוטמים בזהירות את הצלחות בניילון פרפין ומדגרים אותן באופן סטטי במשך שבעה ימים בחום של 30 מעלות צלזיוס. כדי לאסוף פליקל מהצלחת, לחץ על צד אחד של הפליקל כדי להרים את הקצה הנגדי והרם אותו בעזרת מלקחיים.

לאחר מכן, העבירו בנפרד את הפליקלים לבארות של צלחת שש בארות. טפל בהם ב -12 מיליליטר של 0.1 נתרן הידרוקסיד רגיל ב 80 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות כדי לליז את התאים. לאחר מכן, הסר את הנתרן הידרוקסיד ונטרל את הפליקלים המטופלים על ידי שטיפה יסודית שלהם עם 12 מיליליטר מים טהורים במיוחד למשך 24 שעות עם תסיסה בצלחת שש בארות.

במהלך הדגירה הזו, החלף את המים כל שש שעות. בסיום הדגירה, הפליקלים צריכים להיות לבנים. לאחר מכן, הניחו את הפליקלים על מחצלות סיליקון וייבשו אותם בחום של 50 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות כדי להכין אותם למדידת משקל יבש.