ספיגת DNA המושרה על ידי מיומנות בסטפילוקוקוס זהוב

קחו תרבית S. aureus רגישה לאנטיביוטיקה כלורמפניקול.

צנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים ולהסיר את הסופרנטנט.

העבירו את הגלולה לצינור המכיל מדיה מגבילה חומרים מזינים ודגרו. מתח תזונתי משפר את היכולת - יכולתו של החיידק להפנים דנ"א זר.

שוב צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את הגלולה במדיה טרייה המגבילה חומרים מזינים.

לאחר מכן, הוסף DNA המופק מזן S. aureus הנושא גן עמיד לכלורמפניקול. דגירה.

מנגנון קליטת ה-DNA מעבד את ה-DNA לגדיל יחיד ומעביר אותו לציטופלזמה, שם הוא משתלב בכרומוזום החיידקי.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את הגלולה במדיה עשירה בחומרים מזינים.

העבירו את התרחיף לאגר מותך עשיר בחומרים מזינים המכיל כלורמפניקול.

יוצקים את התערובת לכלי ודוגרים.

צמיחת מושבות עמידות לכלורמפניקול מעידה על קליטה מוצלחת של DNA.

תרבית התא הנמען למשך הלילה, בחמישה מיליליטר TSB ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול. למחרת בבוקר, העבירו 0.5 מיליליטר מתרבית הלילה לצינור של 1.5 מיליליטר.

לזרז את התאים על ידי צנטריפוגה. לאחר מכן השעו את התאים עם 10 מיליליטר מדיום CS2 בצינור של 50 מיליליטר. לאחר מכן מגדלים את החיידקים ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-180 סיבובים לדקה במשך שמונה שעות עד לשלב האקספוננציאלי המאוחר.

קצור את התאים על ידי צנטריפוגה. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים ב-10 מיליליטר של מדיום CS2 טרי. הוסף 10 מיקרוגרם של פלסמיד מטוהר או DNA גנומי לתרחיף התאים.

לנער את התרבות ב -180 סיבובים לדקה. ואז אוספים את התאים על ידי צנטריפוגה. השעו מחדש את התאים ב -10 מיליליטר של מדיום BHI.

מערבבים את תרחיף התאים עם 90 מיליליטר תוסף אגר BHI מומס עם 32 מיליגרם לליטר כלורמפניקול, וחמישה מיקרוגרם לליטר טטרציקלין בניסוי הבקרה. יוצקים את התערובת לתוך צלחות הפטרי של 90 מילימטר ומצננים במהירות ומניחים לאגר להתמצק. שכפל מושבות באמצעות קיסמים לצלחות המכילות אנטיביוטיקה מתאימה כדי לאשר את מאפייני העמידות שלהן.