בדיקה מבוססת נוזל Multiwell לסינון C. elegans Knockdowns
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:35 דק׳ • September 26th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המכילה מדיה אגר שזוהתה מראש עם חיידקי RNAi, עם או בלי תוספת ספציפית לגן המכוונת לגן C. elegans .
הזרעים סינכרנו תולעים בשלב L1 לתוך הבארות ודגרו עליהן כדי לאפשר הזנה מחיידקי ה-RNAi.
התוספת מייצרת RNA מפריע המכוון לגנים ספציפיים של תולעים, ויוצר פנוטיפ נוקדאון ספציפי לגן.
הוסף חיץ לבארות והשהה בעדינות את התולעים.
העבירו את המתלה לצלחת באר עמוקה ואפשרו לתולעים להתיישב על ידי כוח הכבידה.
הסר את הסופרנטנט, תוך שמירה על חיץ מסוים.
שטפו את התולעים עם חוצץ, ואז השליכו את הסופרנטנט והשאירו כמות קטנה של חוצץ.
לאחר מכן, קח צלחת בדיקה מרובת בארות המכילה חיידקים פתוגניים.
הוצא מספר מוגדר של תולעי בקרה ונוקדאון לבארות שלהן כדי לאפשר אינטראקציות מארח-פתוגן. החיידקים הפתוגניים מפרישים תרכובות הגורמות לתמותת תולעים.
השווה את תמותת התולעים כדי להעריך את ההשפעה של הפלה ספציפית לגן על הישרדות התולעים.
הוסף מיליליטר אחד של S בזל לכל באר של צלחת של 24 בארות המכילה 300 תולעים לבאר. מערבבים בעדינות את התולעים על ידי ניעור הצלחת, ואז מעבירים תולעים לצלחת באר ריקה וסטרילית בעומק 24.
אפשר לתולעים להתיישב בכוח הכבידה, כחמש דקות. שאפו את הסופרנטנט, השאירו כמיליליטר אחד לבאר, ואז הוסיפו 7 מיליליטר של S בזאלי לכל באר. חזור על הכביסה פעמיים נוספות, ולאחר מכן לאחר הכביסה הסופית שאפו את כל הנוזלים מלבד כ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים