הערכת תמותה הנגרמת על ידי חיידקים פתוגניים בזחלי C. elegans

התחל עם חיידק פתוגני שגדל על אגר.

מגרדים את החיידקים, משעים אותם במאגר ומוסיפים מדיום לשמירה על כדאיות החיידקים.

הוצא את המתלה למיקרופלייט.

לאחר מכן, קחו זנים נפרדים של זחלי C. elegans , עם רגישות מוגברת לפתוגנים או עם עמידות מוגברת, ואפשרו להם להתיישב.

הסירו את הסופרנטנט, השעו מחדש את הזחלים במדיום טרי והעבירו אותם לתוך המיקרופלטה המכילה את החיידקים.

אוטמים את המיקרופלטה בקרום חדיר גז ודוגרים. החיידקים מפרישים מטבוליטים רעילים המפעילים מסלולי לחץ ומובילים למוות של תאים.

שטפו את הבארות כדי לחסל את החיידקים, הוסיפו צבע פלואורסצנטי שאינו מתאים לתאים, ודגרו.

הצבע חודר רק לתאי הזחל המתים עם ממברנות משובשות ונקשר לחומצות הגרעין שלהם.

שטפו כדי להסיר עודפי צבע ודמו את התולעים המוכתמות בפלואורסצנט כדי להעריך את התמותה בזנים הרגישים והעמידים.

כדי לבצע בדיקת הרג נוזלים השתמש במגרד תאים כדי להסיר את P . aeruginosa מצלחת SK ולהשעות מחדש את החיידקים בכ-5 מיליליטר של S בזאלי.

בעזרת ספקטרופוטומטר מודדים את ה-OD 600 של תרחיף החיידקים. הכן 24 מיליליטר של מלאי מדולל של P. aeruginosa ב-S בזאלי ב-OD 600 השווה ל-0.09, ולאחר מכן הוסף 21 מיליליטר של מדיה SK נוזלית, ובאמצעות פיפטה רב-ערוצית, העביר 45 מיקרוליטר של חיידקים ומדיה לכל באר של צלחת 384 בארות. שטפו את התולעים ממקורן לצינור חרוטי של 50 מיליליטר, ואפשרו להן