JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:14 דק' • September 26th, 2025
התחל עם זן חיידקי ביולומינסנט ימי הנושא את אופרון הזוהר, המקודד לוציפראז ואנזימים הנדרשים לסינתזה של סובסטרט.
יש להטיל את הזן על צלחת אגר עשירה בחומרים מזינים בתוספת מי ים מלאכותיים כדי לחקות מליחות מקומית ולתמוך בגדילה.
דגירה כדי להשיג מושבות נפרדות, ולאחר מכן לבודד ולחסן מושבה בודדת למדיום נוזלי המכיל מי ים מלאכותיים.
דגירה עם תסיסה כדי לקדם צמיחה בן לילה בשלב האקספוננציאלי.
העבירו נפח מוגדר של תרבית הלילה למדיום טרי ודגרו עליו כדי להגביר את צפיפות החיידקים.
ככל שהאוכלוסייה מתרחבת, חיידקים משחררים משרה עצמית, מולקולות איתות המצטברות ומתפזרות לתאים, שם הם נקשרים לקולטנים תוך-תאיים, ומפעילים את אופרון הזוהר.
הפעלה זו גורמת לביטוי לוציפראז ולביוסינתזה של המצע.
לוציפראז מזרז חמצון מצע, פולט אור כחול-ירוק.
עקוב אחר תרבית הביולומינסנציה כאינדיקטור להפעלת אופרון זוהר ופליטת אור בחיידקים ימיים.
לאחר הכנת המדיה על פי פרוטוקול הטקסט, פס את זני החיידקים הביו-לומינסצנטיים על לוחות אגר בינוניים של מי ים מלאכותיים, ודגרו אותם בטמפרטורה של 24 עד 30 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
הכינו תרבית לילה על ידי חיסון 100 מיליליטר של מדיום מי ים מלאכותיים עם מושבה אחת מהצלחת. לאחר מכן דגרו על התרבית בטמפרטורה של 24 עד 30 מעלות צלזיוס ו-120 סל"ד למשך הלילה. למחרת, חסנו 800 מיליליטר של מדיום מי ים מלאכותיים עם 8 מיליליטר של תרבית לילה.
דגרו על תאי החיידקים בטמפרטורה של 24 עד 30 מעלות צלזיוס, ו-120 סל"ד והתבוננו בתאים עד שהם מתחילים לזרוח.
מאמר זה מדגים את הגידול והניטור במקום (in situ) של חיידקים ימיים בילומניסנטיים כדי לחקור את ההפעלה של האופרון של הלומניסנציה המתווכת על ידי חיש-מספר (quorum-sensing). הפרוטוקול מאפשר תצפית בזמן אמת על צפיפות התאים ופליטת האור, ומספק תובנות לגבי תקשורת מיקרוביאלית ובקרת גנים.
ניטור בזמן אמת של הפעלת אופרון לומנסנס (luminescence operon) בחיידקים ימיים מספק קריאה כמותית וישירה של ביטוי גנים המתווך על ידי חישוש רב (quorum-sensing). יכולת זו מאפשרת תיקוף של מטרות בשלב מוקדם והפחתת סיכונים מכניסטיים במחקרי תקשורת מיקרוביאלית ובקרת גנים. גישה זו תומכת בביטחון ניבוי בבדיקת מסלולים ובגנומיקה תפקודית בתוך תהליכי גילוי.
שיטה זו משתלבת ברצף הגילוי, החל מבדיקת השערות מוקדמות, דרך פיתוח בדיקות ועד למחקר תרגומי במערכות מיקרוביאליות.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026