אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:27 דק׳ • September 26th, 2025
התחילו בתרבית E. coli שטופלה מראש באנטיביוטיקה.
אנטיביוטיקה זו חוסמת את חלוקת התאים, וכתוצאה מכך נוצרים תאים חוטיים מוארכים עם תכולת DNA מוגברת.
צלחת חלק מהתרבית על צלחת אגר עשירה בחומרים מזינים ודגירה.
תאים חוטיים אינם מתחלקים למרות המשך הצמיחה; רק תאים שאינם חוטים יוצרים מושבות, וכתוצאה מכך ספירת מושבות נמוכה.
מדללים את תרבית החיידקים שנותרה ומוסיפים צבע קושר DNA פלואורסצנטי. לאחר מכן, דגרו בחושך.
הצבע נכנס לתאים ונקשר ל-DNA.
מערבולת את הדגימה ואז מעבירה אותה דרך ציטומטר זרימה.
כמות האור המפוזר מכל תא תואמת את גודלו.
באופן דומה, פלואורסצנטיות הנפלטת מחומצות גרעין קשורות לצבע מצביעה על תכולת ה-DNA החיידקית.
תאים שטופלו באנטיביוטיקה מראים פיזור ופלואורסצנטיות מוגברים, המשקפים צמיחה חוטית והמשך שכפול DNA ללא חלוקה.
זה מדגים שינויים בפיזיולוגיה של החיידקים הנגרמים על ידי אנטיביוטיקה המעכבת חלוקת תאים.
הכן דילולים סדרתיים פי עשרה, עד 10 עד מינוס שביעי, מתוך 200 מיקרוליטר של דגימת תרבית במדיום טרי.
מערבבים בין כל דילול על ידי מערבולת עדינה מאוד או על ידי היפוך הצינור. צלחת 100 מיקרוליטר של הדילול המתאים על לוחות אגרוז LB שלא נבחרו ודגירה למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס. למחרת, ספרו את מספר המושבות כדי לקבוע את ריכוז התאים ברי קיימא בכל דגימת תרבית.
שרטט את ה-CFU למיליליטר כפונקציה של זמן עבור תרביות ה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים