JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 1:28 דק' • October 30th, 2025
קח תרבית של Corynebacterium glutamicum, שעבר טרנספורמציה עם פלסמיד הנושא גן מדווח פלואורסצנטי במורד הזרם של האנטי-טרמינטור של חומצה ריבונוקלאית או רצף RAT, בצלחת מרובת בארות.
במהלך השעתוק, ה-RAT-RNA יוצר מבנה לולאת גזע החוסם RNA פולימראז, ועוצר את ביטוי הגן המדווח.
הפלסמיד גם מבטא באופן מכונן את LicV, חלבון היתוך המורכב מחלבון קושר RAT-RNA, LicT, ותחום ה-VVD הרגיש לאור כחול.
בחושך, LicV נשאר מונומרי ואינו נקשר ללולאת הגזע RAT-RNA, החוסמת את השעתוק של הגן המדווח.
האירו את התרבית באור כחול כדי לגרום לשינוי קונפורמציה בתחום ה-VVD, מה שמפעיל דימריזציה של LicV.
ה-LicV המעומעם נקשר ל-RAT-RNA, פותח את מבנה לולאת הגזע ומאפשר ל-RNA פולימראז לתמלל את הגן המדווח, ולייצר את חלבון המדווח הפלואורסצנטי.
התבונן בתרבית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
פלואורסצנטיות מדווחת חזקה לאחר תאורת אור כחול ופלואורסצנטיות מינימלית בחושך מאשרת בקרה אופטוגנטית מוצלחת.