אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 1:28 דק׳ • October 30th, 2025
קח תרבית של Corynebacterium glutamicum, שעבר טרנספורמציה עם פלסמיד הנושא גן מדווח פלואורסצנטי במורד הזרם של האנטי-טרמינטור של חומצה ריבונוקלאית או רצף RAT, בצלחת מרובת בארות.
במהלך השעתוק, ה-RAT-RNA יוצר מבנה לולאת גזע החוסם RNA פולימראז, ועוצר את ביטוי הגן המדווח.
הפלסמיד גם מבטא באופן מכונן את LicV, חלבון היתוך המורכב מחלבון קושר RAT-RNA, LicT, ותחום ה-VVD הרגיש לאור כחול.
בחושך, LicV נשאר מונומרי ואינו נקשר ללולאת הגזע RAT-RNA, החוסמת את השעתוק של הגן המדווח.
האירו את התרבית באור כחול כדי לגרום לשינוי קונפורמציה בתחום ה-VVD, מה שמפעיל דימריזציה של LicV.
ה-LicV המעומעם נקשר ל-RAT-RNA, פותח את מבנה לולאת הגזע ומאפשר ל-RNA פולימראז לתמלל את הגן המדווח, ולייצר את חלבון המדווח הפלואורסצנטי.
התבונן בתרבית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
פלואורסצנטיות מדווחת חזקה לאחר תאורת אור כחול ופלואורסצנטיות מינימלית בחושך מאשרת בקרה אופטוגנטית מוצלחת.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים