Name: הקלטות אלקטרו מתוך מסלול של סיבים ענק ד melanogaster /em (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-14T17:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 53 s
Description: למדו הקלטות אלקטרו ממערכת הסיבים הענקיים ב-Drosophila melanogaster. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר שידור סינפטי בשרירי DLM ו-TTM לחקר מעגלים עצביים ופיזיולוגיה עצבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי קרן Wellcome להעניק LP

1. ציוד וחומרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניסויים אלה להשתמש הגדרת תקן electrophysiology מורכבת ממריץ, יחידת בידוד גירוי, שני מגברים microelectrode, מערכת רכישת נתונים ומחשב עם תוכנת האוסף. ציוד נוסף כולל כלוב פאראדיי, stereomicroscope על סטנד בום, שולחן בידוד רעידות, מקור האור, פלטפורמה ההקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמש micromanipulators משמשים. שני micromanipulators דורשים שולט בסדר עבור מיקום האלקטרודות הקלטה, ואילו שלושת האחרים micromanipulators רק דורשים שולטת ברוטו לתפקיד שתי אלקטרודות הגירוי האלקטרודה לקרקע. Micromanipulator עבור האלקטרודה הקלטה DLM ממוקם בקצה הזנב של התכשיר (שמאל של הנסיין) לבין micromanipulator עבור האלקטרודה הקלטה TTM ממוקם בין הנסיין לבין הצד של התכשיר (מעט שמאלה של הנסיין). שני micromanipulators כי תקיים את האלקטרודות סימולציה ממוקמים בראש ההכנה (מימין של הנסיין). Micromanipulator עבור אלקטרודה הקרקע ממוקמת בקצה המרוחק של התכשיר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך הקלטה microelectrodes זכוכית עם התנגדויות של 40-60 MΩ ולאחסן שטוח בצלחת נתמך על ידי שעווה. עבור גירוי, שתי אלקטרודות טונגסטן אלקטרוליטים (NaOH) חידד משמשים. תיל טונגסטן, או אלקטרודה מפוברק אלקטרוליטים השלישית היא לשמש קרקע. האלקטרודות מגרה הקרקע מוכנים ומצורפת micromanipulators לפני תחילת הפגישה ניסיוניים לא צריך להיות מוחלף למשך הפגישה. </li></ol> 2. הכנת ד melanogaster <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הציוד שלך מוגדר, זה הזמן להכין את הזבובים. הרדימי הזבובים על ידי קירור עליהם קרח או באמצעות ה-CO 2. אם ה-CO 2 משמש, ולאחר מכן לאפשר זמן מספיק (כ 20mins) את ההשפעות של הגז להתפוגג לפני תחילת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים להעביר את הזבובים בעדינות על רגליהם לצלחת המכילה מצע של שעווה רכה משופע בזווית של ° 45 בקירוב. לצד ארבעת הצעדים נעשים תחת מיקרוסקופ לנתח מן הציוד (אבל קרוב) ההקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלב הבא הוא להבטיח את לטוס שעווה. המזרח בצד הגחון לטוס למטה, עם למעלה הקדמי שלה מול במדרון. בעזרת זוג מלקחיים בסדר, להאריך את הרגליים כלפי חוץ, בזוגות, ולדחוף אותם לתוך השעווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היכרות עם מיקום השרירים שיירשמו מ: אורך השריר הגבי, או DLM, ואת שריר tergotrochanteral, או TTM. האתרים מצורף subcuticular של DLMs להתכתב עם האזור בין קו האמצע החזי ואת הגב הקדמי זיפים (או setae). האתרים מצורף TTM ממוקמים dorsally של האחורי ואת הקדמי העל עלאר זיפים. וודא כי הכנפיים לא לחסום את הגישה סיבי DLM או TTM, החזק את הכנפיים החוצה "דבק" אותם בשעווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות זוג נאה של מלקחיים, למשוך את חוטם החוצה בזהירות, לאבטח אותו על ידי שיקוע אותו לתוך השעווה. זהו צעד קריטי, כי דורש קצת תרגול מאז חוטם הוא רך בקלות מנותק משאר הראש. אם זה יקרה, לבטל את לטוס ולהתחיל מחדש. אי לאבטח את הראש בדרך זו מוביל לבעיות כאשר החדרת אלקטרודות גירוי דרך העיניים. </li></ol> 3. הצמדת אלקטרודות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לטוס מעוגנת השעווה, להעביר את המנה עם לטוס המצורף מתחת stereomicroscope כי הוא נמצא בתוך כלוב פאראדיי. המזרח לטוס הצידה עם הראש של הזבוב בצד ימין של הנסיין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלב הבא הוא להכניס את האלקטרודות. אלקטרודות קרקע ועידוד יכול להיות מוכנס בלי להסתכל מבעד למיקרוסקופ. הקלטות טוב להסתמך על impalement מדויק, כך שזה רעיון טוב להתאמן הטיפול micromanipulators. תביאו את האלקטרודות קרוב האתרים של הכניסה בעזרת micromanipulators כדי להקל על ביצוע נאות שלהם בהקלטות הבאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את האלקטרודה לתוך הקרקע סוף האחורי של הבטן באמצעות גלגלי התאמה על micromanipulator. כדי למקם את האלקטרודות טונגסטן חידד גירוי במוח, השתמש micromanipulator עמדת קצה אחד של האלקטרודות כך זה פשוט נוגע באחד עיניו של זבוב. לעשות את אותו הדבר עם השני, כך האלקטרודות הן רק נגיעה החיצוני של כל עין. ואז לדחוף את האלקטרודות, בתורו, דרך עין כל כך קצות האלקטרודות להגיע למוח ממוקם בחלק האחורי של הקפסולה הראש (כ 2-3mm). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלקטרודות המונחות בצורה נכונה יפעיל את מערכת סיבים ענק. כדי לבדוק זאת מגרה את האלקטרודות ממוקמות כראוי, חל גירוי קצר (0.03 ms) של 30-60V על פני אלקטרודות גירוי, ולחפש תנועת הכנפיים של עוויתות שרירים טיסה / הרגל " </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלב הבא הוא אל גב למלא את microelectrodes זכוכית עם 3M KCl באמצעות המילטון או חום שלף מזרק פלסטיק, ולהכניס אותם לתוך הקנס שליטה micromanipulators. Microelectrodes הוכנס כראוי יכול לשמש מספר סבבי ניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלקטרודה ההקלטה הראשון יהיה מוכנס לתוך סיב DLM. ישנם שני DLMs סימטרי בילטרלי, כל אחד מורכב משישה סיבי שריר בודדים. ההקלטות ניתן לעשות זאת מכל שישה סיבים, אולם הנפוץ ביותר הם סיבי DLM 45 א ו - 45B בשל נגישות טובה שלהם דרך הצד הגבי של לציפורן החזה, ואת העובדה כי הן סיבים מעוצבבים על ידי motorneuron אותו . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש micromanipulator בצד הרחוק ממך, להוסיף אלקטרודה הקלטה לתוך סיב DLM 45 א או ב השיפוע של הפלטפורמה מאפשרת אלקטרודה DLM להיכנס לציפורן הגב על זווית ~ ° 60-90, אשר מסייע לחדירה. השתמש בתוכנה במצב אוסצילוסקופ ומסתכל על צג המחשב תוך כדי החדרת אלקטרודות הקלטה לתוך בית החזה. כאשר האלקטרודה חתמה שריר הבסיס יירד כמעט לאפס או ערך שלילי. מבחן עם גירוי בודד כדי לראות אם ניתן לראות את תגובת השרירים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את האלקטרודה הקלטה אחרים לתוך TTM הקרוב ביותר אליך. אלקטרודה זו מוכנס רוחבית, מולך, עקב המיקום של האתר מצורף השריר. שוב להתבונן בצג תוך כדי לעשות את זה ולבדוק עם גירוי בודד פעם עקבות מצביע האלקטרודה היא בשריר. </li></ol> 4. גירוי ו הקלטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כעת אתה מוכן להתחיל מגרה את המוח ואת התגובות הקלטה מהרגל והשרירים הטיסה. החל גירוי קצר (0.03 ms) על פני אלקטרודות גירוי החל V 30 ו גוברת V 60 עד שאתה רואה תגובה (כלומר עווית שרירים, וכן שלילת קוטביות תא שריר כפי שנצפה על צג המחשב). במשך שארית של הניסוי, להגדיר את V 5-10 מתח מעל סף התגובה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד חביון התגובה, לתת לפחות 5 גירויים יחיד עם תקופת מנוחה 5 השני בין כל גירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את "תדירות הבאים" על ידי אספקת הרכבות של גירויים בקצב שונה. בדרך כלל 10 רכבות של 10 גירויים ניתנים ב 100Hz (10ms בין כל גירוי), 200Hz (5ms בין כל גירוי) ו 300Hz (3ms בין כל גירוי). אפשר תקופת מנוחה של 2 שניות בין כל רכבת של גירויים. </li></ol> 5. תוצאות: latencies תגובה ותדירות בעקבות במסלול סיבים ענק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חביון התגובה הוא הזמן בין גירוי של המוח שלילת קוטביות של השריר. נתון זה משווה את latencies התגובה DLM ו - TTM לגירוי אחד. Latencies בין 0.7 ו 1.2 ms עבור מסלול GF-TTM ובין 1.3 ו 1.7 ms עבור מסלול GF-DLM מצביעים הכנה בריאה טכניקת ההקלטה תקין. Latencies יכול להשתנות עם טמפרטורה, גנוטיפ, הרקע הגנטי לבין גיל. איור 1 (A ו-B). הנציג עקבות מראה תגובות מוקלטות מן TTMs ו DLMs בעקבות גירוי יחיד ליישם במוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפי שמוצג כאן, הקלטות TTM את ההצגה השתנות יותר במונחים של משרעת וצורה הפוטנציאל postsynaptic (PSP) בהשוואה לאלה של סיבים DLM גדול; זה השתנות מוגברת בשל גודלו הקטן של סיבי השריר TTM. השתנות זו, לעומת זאת, אינו משפיע על השהיית התגובה ערכי מסלול Fiber-to-TTM ענק. "חביון התגובה" איור 1 (C ו-D). עקבות נוסף מתוך 4 זבובים הפרט הן עבור TTM ו DLM. הערה עקבות TTM התערוכה השתנות בצורת PSP אבל חביון התגובה אינה מושפעת. עבור DLM יש השתנות פחות בכושר PSP. <img src="/files/ftp_upload/2412/2412fig1.jpg" alt="איור 1 A-D" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1-D"> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השווה את "תדירות הבאים" ב 100 הרץ, 200 הרץ, ו 300 הרץ על ידי חישוב שיעור התגובות מוצלח (מתוך 10) עבור DLM והן המסלולים TTM בתדר כל גירוי. ב 100 הרץ, הן TTM ו DLM לעקוב אחר גירויים 01:01. בתדרים גירוי מעל 100 הרץ, התגובות DLM להתחיל להראות כשלים כי מתווך סינפסה כימית בין שני interneurons אין מספיק זמן להתאושש בין גירויים. התגובות TTM, לעומת זאת, נשארים עם גירויים 01:01 ואף מעבר 300Hz. איור 2. עקבות נציג מראה את "תדירות הבאים" הקלטות. ב 100Hz, הן TTMs ו DLMs להגיב לכל הגירויים 10 (משמאל). ב 200Hz, התגובות DLM להתחיל להיכשל (כוכבית). <img src="/files/ftp_upload/2412/2412fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> </li></ol>6. נציג תוצאות Wild סוג קצרי חביון תגובות (אלקטרודות לגירוי ממוקמים העיניים, תוך עקיפת קולטנים חושי מפעילה את המעגל GF ישירות) תלוי גנוטיפ, רקע גנטי, טמפרטורה גיל, נעים בין 0.7 ו 1.2 ms עבור מסלול GF-TTM ו 1.3 and1.7 ms עבור מסלול GF-DLM (Tanouye ו ויימן, 1980, תומאס ויימן, 1984; אנגל וו, 1992; אלן Murphey, 2007; פלן et al, 2008;. אוגוסטין ואח', טרם פורסם). . זה חביון TTM קצר מאוד בשל החזקה GF-TTMn אלקטרוכימיים סינפסה של מסלול monosynaptic ואת חביון DLM מתרחשת עוד בגלל האופי disynaptic של מסלול, כמו גם את נוכחותו של סינפסה כימית (PSI-DLMn). בינוני וארוך חביון תגובות (&gt; 3 ms) כתוצאה ההפעלה של afferents GF ו מושגות גם באמצעות גירוי בעוצמה נמוכה יותר או מתן אות חזותי ("אור-off"). ב 100Hz הן TTM ו DLM צריך לעקוב אחר גירויים 01:01. מעל 100Hz התגובות DLM יתחיל להראות כשלים כמו סינפסה כימית בין PSI ו DLMns אין מספיק זמן להתאושש בין גירויים פחות מ 10ms מזה. התגובות TTM, לעומת זאת, יישאר 01:01 עם גירויים ואף מעבר 300Hz (Tanouye ו ויימן, 1980; אנגל וו, 1992;. Allen et al, 2007;. מרטינז et al, 2007). מוטציות בגן shakB, קידוד פער תסיסנית צומת ערוץ ("innexin"), להגדיל באופן משמעותי את חביון התגובה של מסלול GF-TTM (~ 1.5 ms) ואילו הסניף GF-DLM אינו מגיב (אלן Murphey, 2007; פלן et al. 2008). תגובת מוטציה ניתן לשחזר על ידי גירוי ישיר הגנגליונים החזה, הוכחת כי ההשפעה אינה מתעכבת בשל שידור neuromuscular שיבשו. היכולת לעקוב אחר גירויים בתדירות גבוהה נפגעת גם מוטציות אלה לעומת סוג בר זבובים שבו GF-DLM ו GF-TTM המסלולים הם בדרך כלל מסוגלים לעקוב אחר גירויים 10 עם יחס 1:01 עד Hz 100 ו - 300 הרץ, בהתאמה. חשוב לציין כי תדרים אלה הם הרבה מעל תדרים גירוי נורמלי שהתקבלו על ידי כיווץ השרירים במהלך הטיסה מתמשכת (30-10 הרץ) (Hummon וקוסטלו, 1989). פרמטר נוסף המשמש לתיאור את היציבות של תפוקות GFS היא "תקופת עקשן", או זמן מינימלי בין הפולסים גירוי התאום כי עדיין מייצרת שתי תגובות של השריר. בפעם עקשן נע בין 1-4 אלפיות עבור TTMs ו 7-15 מילישניות עבור DLMs. תקופת עקשן ארוך יחסית עבור DLMs נובע יחסית יציב סינפסות כימיות בצומת PSI-DLMn (Tanouye ו ויימן, 1980; Gorczyca היכל, 1984; אנגל וו, 1992; בנרג'י et al, 2004;. אלן Godenschwege, 2010).

<ol><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. Electrophysiological Recordings from the Drosophila Giant Fiber System. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAllen%2C+MJ+%22Drosophila+Neurobiology%3A+A+Laboratory+Manual%22">Drosophila Neurobiology: A Laboratory Manual</a>. Zhang, B., Freeman, M. R., Wadde, S. , 1st Lab ed, Cold Spring Harbor Press. (2010).</li>
<li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+an+escape%3A+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin Cell Dev Biol. 17, 31-41 (2006).</li>
<li>Allen, M. J., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemical+component+of+the+mixed+GF-TTMn+synapse+in+Drosophila+melanogaster+uses+acetylcholine+as+its+neurotransmitter%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The chemical component of the mixed GF-TTMn synapse in Drosophila melanogaster uses acetylcholine as its neurotransmitter.</a> Eur J Neurosci. 26, 439-445 (2007).</li>
<li>Banerjee, S., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+flight+and+associated+neuronal+rhythmicity+in+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate+receptor+mutants+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Loss of flight and associated neuronal rhythmicity in inositol 1,4,5-trisphosphate receptor mutants of Drosophila.</a> J Neurosci. 24, 7869-7878 (2004).</li>
<li>Engel, J. E., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+membrane+excitability+mutations+affecting+potassium+and+sodium+currents+in+the+flight+and+giant+fiber+escape+systems+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Interactions of membrane excitability mutations affecting potassium and sodium currents in the flight and giant fiber escape systems of Drosophila.</a> J Comp Physiol A. 171, 93-104 (1992).</li>
<li>Gorczyca, M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+cholinergic+synapse+in+the+giant+fiber+pathway+of+Drosophila+using+conditional+mutations+of+acetylcholine+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Identification of a cholinergic synapse in the giant fiber pathway of Drosophila using conditional mutations of acetylcholine synthesis.</a> J Neurogenet. 1, 289-313 (1984).</li>
<li>Hummon, M. R., Costello, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+fiber+activation+of+flight+muscles+in+Drosophila%3A+asynchrony+in+latency+of+wing+depressor+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Giant fiber activation of flight muscles in Drosophila: asynchrony in latency of wing depressor fibers.</a> J Neurobiol. 20, 593-602 (1989).</li>
<li>Jacobs, K., Todman, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptogenesis+in+the+giant-fibre+system+of+Drosophila%3A+interaction+of+the+giant+fibre+and+its+major+motorneuronal+target%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Synaptogenesis in the giant-fibre system of Drosophila: interaction of the giant fibre and its major motorneuronal target.</a> Development. 127, 5203-5212 (2000).</li>
<li>King, D. G., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+giant+fibre+pathway+in+Drosophila.+I.+Three+thoracic+components+of+the+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the giant fibre pathway in Drosophila. I. Three thoracic components of the pathway.</a> J Neurocytol. 9, 753-770 (1980).</li>
<li>Martinez, V. G., Javadi, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+climbing+behavior+and+neural+circuit+physiology+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in climbing behavior and neural circuit physiology in Drosophila.</a> Dev Neurobiol. 67, 778-791 (2007).</li>
<li>Miller, A. The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+A+%22Biology+of+Drosophila%22">Biology of Drosophila</a>. Demerec, M. , 2nd, Hafner. New York. 502-503 (1965).</li>
<li>Phelan, P., Goulding, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+of+rectification+at+identified+electrical+synapses+in+the+Drosophila+giant+fiber+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism of rectification at identified electrical synapses in the Drosophila giant fiber system.</a> Curr Biol. 18, 1955-1960 (2008).</li>
<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect%2C+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect, Drosophila melanogaster.</a> J Comp Neurol. 88, 347-409 (1948).</li>
<li>Tanouye, M. A., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+outputs+of+giant+nerve+fiber+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Motor outputs of giant nerve fiber in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 44, 405-421 (1980).</li>
<li>Thomas, J. B., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+altering+synaptic+connectivity+between+identified+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mutations altering synaptic connectivity between identified neurons in Drosophila.</a> J Neurosci. 4, 530-538 (1984).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

אחד הדברים החשובים ביותר יש לשים לב כאשר מנסה להשיג הקלטות באיכות גבוהה היא האוריינטציה בריאות תקין של התכשיר. באופן אידיאלי, הזבוב עדיין צריך להיות חי בסוף הפגישה הקלטה ומגיבה לגירויים חשמליים. עבור האלקטרודות ההקלטה באופן היעיל ביותר לחדור את שלד בית החזה, לעוף צריך להיות מודבק על פני השטח בצורה כזו כדי ליצור זווית ישרה עם האלקטרודות, במידת הצורך, החדרת אלקטרודות ניתן להקל על ידי הסרת חלק מן לציפורן החזה הגב עם טונגסטן אזמל ובכך חושפים את השריר טיסה DLM (בשלב זה מציעה יתרון נוסף של ולהקשות על קצות אלקטרודות זכוכית לשבור). כמו כן, הטיפול חייב להילקח להימנע דוחפים את האלקטרודות דרך DLMs ו TTMs ממוקם subcuticularly. הראש של הזבוב צריך להיות מאובטח היטב, כדי לאפשר את האלקטרודות מגרה להיות מוכנס כהלכה לתוך המוח כדי למנוע מהם שלף במהלך הפגישה ההקלטה. בשל גודלו היטב תיאר מורפולוגיה, GFS מייצג את אחד המסלולים העצבית נגיש ביותר תסיסנית. החדירות של סינפסות חשמלי קטן צבעים נותב משקל מולקולרי מאפשר הדמיה של נוירונים יחד חשמלית, וכמה זמין GAL4 קווים מאפשרים לתפעל רמות ביטוי הגנים משנה של תאים או קבוצות תאים (Jacobs et al, 2000;. Allen et al., 2006) בנוסף על היתרונות שהוזכרו לעיל, מביא את שני המרכיבים ואת החזה של ולהציג מאפיינים המעגל כגון התאוששות הרגלה, dishabituation ספונטנית, מה שהופך את GFS תסיסנית מערכת מודל נוח ללימוד הפלסטיות העצבית (אנגל וו, 1996).

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> החברה </td><td> CAT. # </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> S48 כיכר דופק ממריץ </td><td> גראס מכשירים </td><td></td><td> http://www.grasstechnologies.com/ </td></tr><tr><td> גירוי יחידה </td><td> גראס מכשירים </td><td></td><td> http://www.grasstechnologies.com/ </td></tr><tr><td> SIU5 RF שנאי יחידת בידוד </td><td> גראס מכשירים </td><td></td><td> http://www.grasstechnologies.com/ </td></tr><tr><td> 5A שני ערוצים microelectrode תאיים מגבר </td><td> קבלת מכשירים </td><td></td><td> http://www.gettinginstruments.com/ </td></tr><tr><td> Digidata 1440A נתוני מערכת הרכישה </td><td> מולקולרית התקנים </td><td></td><td> http://www.moleculardevices.com/ </td></tr><tr><td> אנלוגי, דיגיטלי Digidata 1320 ותוכנה Axoscope 9.0 </td><td> מולקולרית התקנים </td><td></td><td> http://www.moleculardevices.com/ </td></tr><tr><td> הקלטה פלטפורמה עם micromanipulators ידני </td><td> Narishige, Ins סאטר., Ins העולם Precision. </td><td></td><td> http://narishige-group.com/ http://www.sutter.com/index.html http://www.wpi-europe.com/en/ </td></tr><tr><td> מקור אור </td><td> Fostec </td><td></td><td> http://www.nuhsbaum.com/FOSTEC.htm </td></tr><tr><td> Wild stereomicroscope M5 </td><td> Wild Heerbrugg </td><td></td><td> http://www.wild-heerbrugg.com/ </td></tr><tr><td> בידוד רעידות השולחן </td><td> TMC </td><td></td><td> http://www.techmfg.com/ </td></tr><tr><td> צינורות בורוסיליקט עבור microelectrodes </td><td> סאטר Instrument </td><td></td><td> http://www.sutter.com/index.html </td></tr><tr><td> P-95 micropipette חולץ </td><td> סאטר Instrument </td><td></td><td> http://www.sutter.com/index.html </td></tr><tr><td> Microfil מד 34, 67 מ&quot;מ (מילוי אלקטרודה) </td><td> העולם מכשירי דיוק </td><td> MF34G-5 </td><td> http://www.wpi-europe.com/en/ </td></tr><tr><td> Microdissection כלים (מלקחיים, ...) </td><td> המדע כלים פיין </td><td></td><td> www.finescience.com </td></tr><tr><td> הביתור (סטריאו) מיקרוסקופ </td><td> לייקה </td><td></td><td> http://www.leica-microsystems.com/ </td></tr><tr><td> כלוב פאראדיי </td><td> לא ידוע היצרן </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> אחרים: מזרקים מפלסטיק, האדמה תיל טונגסטן NaOH-חידד אלקטרודות טונגסטן, KCl, פלטפורמה שעווה, מחשב עם צג ...

הקלטות אלקטרו מתוך מסלול של סיבים ענק ד melanogaster</em

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

כאשר מבוגר מבוהל ד melanogaster להגיב על ידי קפיצות באוויר עף משם. במינים חסרי חוליות רבים, כולל ד melanogaster, את &quot;בריחה&quot; (או &quot;להקפיץ&quot;) בתגובה בשלב מבוגר מתווך על ידי מעגל רב רכיב עצבי בשם מערכת סיבים הענק (GFS). גודל גדול השוואתית של נוירונים, מורפולוגיה ייחודית שלהם וקישוריות פשוטה להפוך את GFS מערכת מודל אטרקטיבי עבור הלומדים מעגלים עצביים. מסלול GFS מורכב משני סימטרי בילטרלי סיבים הענק (GF) interneurons אשר האקסונים יורדים מהמוח לאורך קו האמצע לתוך הגנגליון החזי החיבור דרך צוואר הרחם. ב neuromere mesothoracic (T2) של הגרעינים הגחון הטופס GFS אלקטרו כימיות סינפסות עם הדנדריט 1) המדיאלי גדול של motorneuron ipsilateral (TTMn) אשר מניע את השרירים tergotrochanteral (TTM), את פושטי הירך העיקרית הרגל mesothoracic / , ו 2) interneuron שולי synapsing הנגדי (PSI) אשר בצורות להפוך כימיים (cholinergic) סינפסות עם motorneurons (DLMns) של שרירי הגב האורך (DLMs), את מקלוני כנף. מסלול עצבי (ים) לשרירים dorsovental (DVMs), המעליות כנף, טרם הסתדר (DLMs ו DVMs ידועים במשותף כמו שרירי טיסה ישירה - הם לא מחוברים ישירות את הכנפיים, אלא להעביר את כנפיים בעקיפין על ידי לציפורן עיוות בית החזה הסמוכים) (המלך ויימן, 1980;. Allen et al, 2006). הפעלת די הסינפטי של DLMs (דרך PSI) גורמת לעינוי קטן אבל חשוב העיתוי של התכווצות של השרירים הללו ביחס להפעלת monosynaptic של TTM (~ 0.5 ms) המאפשר TTMs תחילה להאריך את עצם הירך ואת להניע את לטוס מעל פני האדמה. TTMs בו זמנית למתוח-להפעיל את DLMs אשר בתורו הדדית למתוח-להפעיל את DVMs למשך הטיסה. מסלול GF יכול להיות מופעל או בעקיפין על ידי הפעלת גירוי חושי (למשל, &quot;משב אוויר&quot; או &quot;כיבוי אורות&quot;), או ישירות על ידי גירוי העל סף חשמלי למוח (המתואר כאן). בשני המקרים, פוטנציאל פעולה מגיע TTMs ו DLMs אך ורק דרך GFS, PSIs, TTM ו / DLM motoneurons, למרות TTMns ו DLMns צריך אחרים, כמו מזוהה עדיין, תשומות חושיות. מדידת &quot;בתגובה חביון&quot; (הזמן בין הגירוי לבין שלילת קוטביות שריר) ואת &quot;בעקבות לגירוי בתדירות גבוהה&quot; (את מספר התגובות מוצלח למספר מסוים של גירויים בתדירות גבוהה) מספק דרך reproducibly ו כמותית להעריך את המצב התפקודי המרכיבים GFS, כולל שני סינפסות המרכזית (GF-TTMn, GF-PSI, PSI-DLMn) ואת כימיים (glutamatergic) neuromuscular צמתים (TTMn-TTM ו DLMn-DLM). זה כבר נעשה שימוש כדי לזהות גנים המעורבים ביצירת סינפסה מרכזי להערכת תפקוד מערכת העצבים המרכזית.

מערכת סיבים הענק הוא מעגל עצבי פשוטה של ​​מבוגר<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; המכיל את הנוירונים הגדול לטוס. אנו מתארים את פרוטוקול לניטור הילוכים הסינפטי דרך מסלול זה על ידי הקלטה פוטנציאלים פוסט סינפטיים ב אורך הגב (DLM) ו tergotrochanteral (TTM) השרירים לאחר גירוי ישיר של interneurons סיבים ענק.

כאשר זבובי *D. melanogaster* בוגרים נבהלים, הם מגיבים בקפיצה לאוויר ובתעופה משם. במינים רבים של חסרי חולייתים, כולל *D. melanogaster*, תגובת ה"מילוט" ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לנטר תמסורת סינפטית דרך נתיב הסיב הענק על ידי הקלטת פוטנציאלים פוסט-סינפטיים משריר גבי גבי אורכי (DLM) ומשריר TTM, בעקבות גירוי ישיר של הסיב הענק בתוך הנוירונים. דבר זה מושג תחילה על ידי קיבוע נכון של זבוב שהורדם בתוך צלחת המכילה מעט שעווה. השלב הבא בפרוצדורה הוא החדרת אלקטרודות גירוי, הארקה והקלטה לתוך הזבוב.השלב האחרון של הפרוצדורה הוא גירוי המוח והקלטת תגובות משרירי הקפיצה והתעופה. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות שינויים בתכונות הפונקציונליות של מסלול הסיב הענק כפונקציה של גנוטיפ, גיל, טמפרטורה וכן הלאה. זאת על ידי הקלטת פרק הזמן שבין הגירוי לתגובה, ועל ידי ספירת מספר התגובות המוצלחות בעקבות רצף גירויים בתדירות גבוהה.שיטה זו יכולה לסייע במענה לכמה מהשאלות המרכזיות בתחום הנוירופיזיולוגיה ולעזור בבחינת התכונות התפקודיות של מסלולים עצביים. ניתן להשתמש בטכניקה זו כניסוי מקדמי שאחריו יבואו ניתוחים גנטיים או מולקולריים, או כדרך להערכת תכונות פיזיולוגיות ותפקודיות בבעלי חיים הנושאים מוטציה ידועה. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית.מכיוון ששלבי ההכנה והפגיעה דורשים זמן למידה, ובשל העובדה שהזבובים קטנים יחסית, יש צורך ברמה מסוימת של יציבות וקואורדינציה שיש לרכוש לפני שניתן לבצע את הניסויים באופן נכון. ניסויים אלו משתמשים במערך אלקטרופיזיולוגי סטנדרטי המורכב ממעורר, יחידה לבידוד גירויים, שני מגברי מיקרו-אלקטרודה, מערכת לרכישת נתונים ומחשב עם תוכנה לאיסוף נתונים.ציוד נוסף כולל כלוב פאראדיי, מיקרוסקופ סטריאו על זרוע תמיכה, שולחן בידוד רעידות, מקור אור ופלטפורמת הקלטה. נעשה שימוש בחמישה מיקרו-מניפולטורים. שני מיקרו-מניפולטורים דורשים בקרות עדינות למיקום אלקטרודות ההקלטה, בעוד ששלושת המיקרו-מניפולטורים האחרים דורשים בקרות גסות בלבד.כדי למקם את שתי אלקטרודות הגירוי ואת אלקטרודת ההארקה, מניחים את המניפולטור של אלקטרודת ההקלטה של ה-DLM בקצה הזנב של הדגימה. את המיקרו-מניפולטור של אלקטרודת ההקלטה של ה-TTM מניחים בין החוקר לבין צד הדגימה. שני המיקרו-מניפולטורים עבור אלקטרודות הגירוי מונחים בראש הדגימה.המיקרו-מניפולטור עבור אלקטרודת ההארקה ממוקם בצדה הרחוק של הדגימה. יש למשוך מיקרו-אלקטרודות זכוכית להקלטה עם התנגדויות של 40 עד 60 mega ohms ולאחסן אותן באופן שטוח בצלחת נתמכת בשעווה. השתמש בשתי אלקטרודות טונגסטן המחודדות באופן אלקטרומגנטי לצורך סטימולציה.השתמשו בחוט גבעול או באלקטרודה שלישית שיוצרה באופן אלקטרומגנטי. כאל הארקה, חברו את אלקטרודות הגירוי וההארקה למיקרו-מניפולטורים לפני תחילת המפגש הניסויי. לא יהיה צורך להחליפם למשך כל המפגש.לאחר הגדרת הציוד, הגיע הזמן להכין את הזבובים. הרדימו את הזבובים על ידי קירורם על קרח למשך 10 עד 15 דקות. השתמשו בפינצטה כדי להעביר בעדינות את הזבוב מרגליו אל צלחת המכילה פלטפורמה של שעווה רכה המונחת בזווית של כ-45 מעלות.השלב הבא הוא קיבוע הזבוב לשעווה. מקמו את הזבוב כאשר צדו הוונטרלי (הבטני) פונה כלפי מטה והחלק האנטריורי (הקדמי) שלו פונה כלפי מעלה על השיפוע. באמצעות פינצטה עדינה, פרשו את הרגליים החוצה בזוגות והחדירו אותן לשעווה.לאחר שתיזהו את מיקומי השרירים שמהם יבצעו את ההקלטות לפני תחילת ניסוי זה, השריר האורכי הגבי (dorsal longitudinal muscle או DLM) והשריר הטורגלי הקנטוראלי (turga TRO cantoral muscle או TTM), אתרי ההיצמדות תת-הcuticular של ה-dlms תואמים לאזור שבין קו האמצע של החזה לבין השערות הגביות הקדמיות. אתרי ההיצמדות של ה-TTM ממוקמים גבנית לשערות ה-supra alar האחוריות והקדמיות; כדי להבטיח שהכנפיים לא יחסמו את הגישה לסיבי ה-DLM או ה-TTM, החזיקו את הכנפיים כלפי חוץ והדביקו אותן לשעווה. בעזרת פינצטה עדינה, משכו בזהירות את ה-psis כלפי חוץ וקבעו אותה על ידי טבילה בשעווה.זהו שלב קריטי הדורש תרגול, כיוון שהprobos הוא רך וניתק בקלות משאר הראש. אם הדבר קורה, יש להשליך את הזבב ולהתחיל מחדש. אי-קיבוע של הראש באופן זה יוביל לבעיות בעת החדרת אלקטרודות העגישה דרך העיניים.לאחר שהזבוב מעוגן לשעווה, הניחו את הדגימה תחת מיקרוסקופ הסטריאו בתוך כלוב פאראדיי, וכוונו את הזבוב לצד כך שראשו יהיה מימין לסדרן. השלב הבא הוא החדרת האלקטרודות. קרבו את האלקטרודות לאתרי ההחדרה בעזרת המיקרו-מניפולטורים כדי להקל על מיקומן הנכון וההקלטות העוקבות; ללא הסתכלות דרך המיקרוסקופ, הורידו את אלקטרודת ההארקה אל הקצה האחורי של הבטן באמצעות גלגלי הכוונון של המיקרו-מניפולטור, כדי להחדיר את אלקטרודות הגירוי המושחזות מטונגסטן אל המוח.השתמשו במיקרו-מניפולטור כדי למקם את קצהו של אחד האלקטרודות, כך שיגע רק באחת מעיני הזבוב. בצעו את הפעולה באופן דומה עם האלקטרודה השנייה, כך ששתי האלקטרודות רק יגעו בחלק החיצוני של כל עין. לאחר מכן, דחפו את האלקטרודות פנימה.סובבו כל עין בכשני עד שלושה מילימטרים, כך שקצות האלקטרודות יגיעו למוח הממוקם בחלק האחורי של קפסולת הראש. אלקטרודות שהוצבו נכון יפעילו את מערכת הסיבים הענקיים (giant fiber system) כדי לבדוק שאלקטרודות הגירוי ממוקמות כראוי. הגהו גירוי קצר של 30 עד 60 וולט דרך אלקטרודות הגירוי וחפשו תנועה של הכנפיים ועוויתות של שרירי התעופה או הרגליים.השלב הבא הוא מילוי חוזר של המיקרו-אלקטרודות מזכוכית ב-potassium chloride בריכוז three molar באמצעות מזרק Hamilton או מזרק פלסטיק שנמשך בחום, והנחתן בתוך המיקרו-מניפולטורים לבקרה עדינה. מיקרו-אלקטרודות שהוכנסו כראוי יכולות לשמש למספר סבבים של ניסויים. אלקטרודת ההקלטה הראשונה תוכנס לתוך סיב DLM.ישנם שני שרירי DLM סימטריים דו-צדית. כל אחד מהם מורכב משישה סיבי שריר נפרדים. ניתן לבצע את ההקלטות מכל אחד מששת הסיבים, עם זאת, הנפוצים ביותר בשימוש הם סיבי ה-DLM 45 A ו-45 B, בשל הנגישות הטובה שלהם דרך הקוטיקולה הגבית של בית החזה, והעובדה ששני הסיבים מעוצבבים על ידי אותו נוירון מוטורי.באמצעות המיקרו-מניפולטור הממוקם בקצהו של מכשיר החדרת הדגימה, יש להחדיר את אלקטרודת ההקלטה אל סיב DLM 45 A או B בצדו של הזבוב הרחוק ביותר. שיפוע הפלטפורמה מאפשר לאלקטרודת ה-DLM לחדור אל הקוטיקולה הדורסלית בזווית של 60 עד 90 מעלות, דבר המסייע לחדירה באמצעות התוכנה במצב אוסילוסקופ. יש להביט במסך המחשב תוך כדי החדרת אלקטרודת ההקלטה אל תוך התורקס.כאשר האלקטרודה חודרת לשריר, קו הבסיס יורד לערך קרוב לאפס או לערך שלילי; בצעו בדיקה באמצעות גירוי בודד כדי לראות אם ניתן להבחין בתגובת השריר. הכניסו את אלקטרודת ההקלטה השנייה לתוך ה-TTM בצד של הזבוב הקרוב אליכם. אלקטרודה זו מוחדרת לטרסאלית מולכם, וזאת בשל מיקום נקודת חיבור השריר.שוב, עקבו אחר הצג בזמן ביצוע פעולה זו. ברגע שהעקבה מעידה כי האלקטרודה נמצאת בשריר, בצעו גירוי בודד כדי לעורר תגובה שרירית. כדי להתחיל בגירוי המוח ובהקלטת תגובות משרירי הרגליים והתעופה, הגבישו גירוי של 0.03 millisecond דרך אלקטרודות הגירוי, החל מ-30 volts ובעלייה עד ל-60 volts, עד אשר תבחינו בעוויתה שרירית ובדפולריזציה של תאי שריר בצג המחשב.עבור שאר הניסוי, הגדירו את המתח לגובה של 5 עד 10 וולט מעל סף התגובה. כדי למדוד את השהיית התגובה, תנו לפחות חמישה גירויים בודדים עם תקופת מנוחה של חמש שניות בין גירוי לגירוי.קבע את תדירות המעקב באמצעות מתן רצפים של גירויים בקצבים שונים. בדרך כלל, ניתנים 10 רצפים של 10 גירויים ב-100 hertz, 200 hertz ו-300 hertz, תוך מתן תקופת מנוחה של שני שניות בין כל רצף גירויים. דמות זו מציגה תגובות שנרשמו מה-TTMs ומה-dlms בעקבות גירוי בודד למוח.השהיית התגובה היא הזמן שחולף בין גירוי המוח לבין דפולריזציה של השריר. הכנה תקינה וטכניקת הקלטה נכונה מאופיינות בהשהיות שבין 0.7 ל-1.2 מילישניות עבור נתיב ה-G-F-T-T-M, ובין 1.2 ל-1.7 מילישניות עבור נתיב ה-GF DLM. ההשהיות עשויות להשתנות בהתאם לגנוטיפ, לרקע גנטי, לטמפרטורה ולגיל, כפי שמוצג כאן.ההקלטות מה-TTM מראות שונות רבה יותר במונחים של אמפליטודה וצורה של הפוטנציאל הפוסט-סינפטי בהשוואה לאלו של סיבי ה-DLM הגדולים. שונות מוגברת זו נובעת מהגודל הקטן של סיבי שריר ה-TTM. עם זאת, שונות זו אינה משפיעה על ערכי השהיית התגובה במסלול מהסיב הענק ל-TTM.איור זה מציג גרייה של TTM ו-DLM ב-100 hertz וב-200 hertz. הן ה-TTMs והן ה-dlms מגיבים לכל 10 הגירויים ב-200 hertz. התגובות של ה-TTM נשארות ביחס של אחד-לאחד, אך התגובות של ה-DLM מתחילות להיכשל.הסיבה לכך ש-DLM אינו עוקב בתדרים של גירוי מעל 100 hertz היא כי לסינפסה הכימית המתווכת בין שני נוירונים אינטר אין מספיק זמן להתאושש בין גירויים. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בכ-30 דקות. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן הניטור של תמסורת עצבית דרך נתיב הסיב הענקי.פעולה זו מבוצעת על ידי גירוי הסיב הענקי המחובר לנוירונים במוח, ולאחר מכן הקלטה משריר הקפיצה ומשרירי התעופה בטורקס.

electrophysiological-recordings-from-giant-fiber-pathway-d

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן אנו מתארים שיטות אלקטרו למדידת בשידור סינפטי בצומת neuromuscular של הזחל תסיסנית. שחרור עורר היא יזמה באופן מלאכותי על ידי המרצת הנוירונים אקסונים מוטוריים, והעברת דרך NMJ ניתן למדוד התגובה postsynaptic עורר בשריר.

שיטות אלקטרו עבור הקלטה פוטנציאלים Synaptic מן NMJ של הזחלים תסיסנית

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

הר הכנה שלמים של המבוגר תסיסנית עצבי חוט הגחון עבור הזרקת סיבים ענק דיי

Nanoinjection לזווג ו Assay Electrophysiology למסך עבור bioactivity של תרכובות באמצעות תסיסנית melanogaster סיבים הענק מערכת

הסרטון מדגים רישום חוץ-תאי של פעילות עצבית ממערכת העצבים המרכזית (CNS) של זחלי דרוזופילה. מערכת העצבים המרכזית הטרנסקטיבית ממוקמת בתא הקלטה, והפעילות החשמלית לעצב יורד נרשמת כדי לקבוע את תדר הירי הבסיסי. לאחר מכן מוצג סוכן בדיקה, והשינוי בתדירות הירי נרשם כדי לקבוע את ההשפעה המעוררת או המעכבת של הסוכן.

רישום חוץ-תאי של פעילות חשמלית במערכת העצבים המרכזית של דרוזופילה

פרוטוקול זה מתאר הקלטה תאית מתגובות פוטנציאל הפעולה שנורו על ידי נוירונים טעם labellar בדרוזופילה.

הקלטת אלקטרו מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Labellar טעם Sensilla

מיקרואלקטרודות חדות מאפשרות אפיון אלקטרופיזיולוגי מדויק של תפוקת קולטני האור והאינטרנוירונים החזותיים בדרוזופילה חיה. כאן אנו מראים כיצד להשתמש בשיטה זו כדי להקליט תגובות מתח באיכות גבוהה של תאים בודדים לגירוי אור מבוקר. שיטה זו אידיאלית לחקר עיבוד מידע עצבי בעיניים של תרכובות חרקים.

שיטת אלקטרו עבור תגובות מתח תאיים הקלטה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור ו interneurons יאירו גירויים<em&gt; In vivo</em

כל תא הקלטות של תסיסנית melanogaster photoreceptors לאפשר מדידה של ספונטני בליטות כהה, בליטות קוונטיות, תגובות מאקרוסקופיות לאור, ואת המתח הנוכחי היחסים בתנאים שונים. בשילוב עם ד melanogaster כלים מניפולציה גנטית, שיטה זו מאפשרת את המחקר של inositol- השומן ליפיד המסלול נתיב היעד שלה, ערוץ TRP.

שיטה אלקטרו-קולית לקולקציית מתח מלא<em&gt; תסיסנית</em&gt; פוטורספטורים

ניתן להקליט זרמים סינפטית focally מ עם העיתון ons סינפטית מטמיעים בצומת דרוזופילה השלישי לחלל הזחלים עצב-שריר. טכניקה זו מאפשרת פיקוח על הפעילות של בוטון סינפטית יחיד.

מוקד Macropatch הקלטות של זרמי סינפטית מצומת דרוזופילה Neuromuscular זחל

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי להקליט את הפעילות החשמלית יורד של מערכת העצבים המרכזית דרוזופילה melanogaster כדי לאפשר את עלות-יעיל ונוח בדיקה של סוכנים תרופתי, מוטציות גנטיות של חלבונים עצבית, ו/או את התפקיד של מסלולים פיזיולוגיים נחקרו.

הקלטה אלקטרופיזיולוגיות של פעילות מערכת העצבים המרכזית השלישית-לחלל דרוזופילה Melanogaster

פרוטוקול זה מדגים אבלציה של תאי לייזר של נוירונים בודדים בזחלי דרוזופילה שלמים. השיטה מאפשרת לחקור את ההשפעה של הפחתת התחרות בין תאי עצב במערכת העצבים המתפתחת.

אבלציה של תאי לייזר בזחלי דרוזופילה שלמים חושפת תחרות סינפטית

למדו הקלטות אלקטרו ממערכת הסיבים הענקיים ב-Drosophila melanogaster. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר שידור סינפטי בשרירי DLM ו-TTM לחקר מעגלים עצביים ופיזיולוגיה עצבית.

הקלטות אלקטרו מתוך מסלול של סיבים ענק ד melanogaster

גלה סרטונים נוספים