מיקרוקלורימטריה איזותרמית לניטור פעילות מטבולית בחיידקים

קח דילולים סדרתיים של תרבית חיידקים והוסף אליקוטים לבקבוקונים קלורימטריים המכילים מצע גידול.

טען את הבקבוקונים האטומים לצלחת מרובת הבארות של מיקרוקלורימטר איזותרמי כדי למדוד את ייצור החום המטבולי.

המכשיר מוחזק בטמפרטורה קבועה כדי להבטיח שהחום שזוהה מקורו אך ורק בחילוף החומרים של החיידקים.

כאשר חיידקים מפרקים חומרים מזינים ומתרבים, הם משחררים חום שחיישנים מזהים בזמן אמת.

במקביל, דגרו בקבוקונים זהים באינקובטור. בעזרת ספקטרופוטומטר, מדוד את הצפיפות האופטית (OD) כדי לנטר את צמיחת החיידקים.

באמצעות האותות הקלורימטריים מהדילול, בנה עקומת פעילות תרמית ותאם אותה עם ערכי OD.

שיא ראשון חד מצביע על נשימה אירובית במהלך צמיחה אקספוננציאלית.

כאשר החמצן הופך למגביל, התאים עוברים לתסיסה אנאירובית, ומייצרים שיא חד שני.

עם הכניסה לשלב הנייח, החיידקים מפרישים אנזימים כדי לפרק חלבונים חוץ-תאיים ולקיים את חילוף החומרים, ומייצרים שיא רחב.