JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:15 דק' • October 30th, 2025
קח שקופית המכילה נבגי חיידקים רדומים ומיקרוספירות פלואורסצנטיות כהפניה.
הנבגים נושאים מדווחים פלואורסצנטיים אדומים וירוקים לחלבוני נביטה, כאשר הממברנה הפנימית מוכתמת בצבע ליפופיל.
התקן את השקופית על מיקרוסקופ תאורה מובנה או SIM המצויד במטרת טבילה בשמן.
אתר את המיקרוספירות הפלואורסצנטיות והתאם את המיקוד כדי למזער את טשטוש התמונה.
לאחר מכן, השתמש באור מועבר כדי לאתר את נבגי החיידקים.
עבור למצב SIM והאיר את הנבגים כדי לעורר את הפלואורופורים.
רכוש תמונות פלואורסצנטיות ברזולוציה גבוהה על פני עומק הנבגים.
על הקרום הפנימי המוכתם בצבע ליפופילי חלבוני הנביטה מופיעים כמוקדים אדומים וירוקים מובהקים. זה מאפשר מיפוי מדויק של מיקום חלבוני הנביטה בתוך נבגי חיידקים.
להדמיה של הדגימות, הנח את השקופית על מיקרוסקופ תאורה מובנה המצויד במטרת שמן 100X, והתמקד במיקרוספירות פלואורסצנטיות של 100 ננומטר.
כוונן את טבעת התיקון באובייקט 100X עד לקבלת פונקציית פיזור נקודה סימטרית כדי למזער את טשטוש התמונות, ובחר שדה ראייה עם כ-10 מיקרוספירות פלואורסצנטיות עגולות. החל התאמת מיקוד סורג עבור אורכי גל העירור המיועדים, במקרה זה, 561 ו-488 ננומטר, כמדריך לתוכנת ניתוח התמונה לפני התמקדות בנבגים עם נורית השידור. צלם תמונת אור שידור במצב ממוצע של 16X עם חשיפות של 20 אלפיות השנייה לכל תמונה.
לאחר מכן, צלם תמונות פלואורסצנטיות גולמיות של הנבגים במיקרוסקופ תאורה מובנה בתלת מימד עם מצב תאורת 3D-SIM.