העשרת ליפופרוטאינים חיידקיים באמצעות הפרדת פאזה של דטרגנט לא יוני

קח ליזט חיידקי המכיל חלבונים הידרופיליים, ליפופרוטאינים ואגרגטים של חלבונים.

הוסף חומר ניקוי קר ולא יוני המסוגל להפריד פאזה בטמפרטורות חמות יותר.

דוגרים על קרח ומערבבים מעת לעת. חומר הניקוי נקשר לחלק השומנים של הליפופרוטאין, ויוצר קומפלקסים של חלבון-דטרגנטים.

מחממים את התערובת כדי לגרום להפרדת פאזה. ליפופרוטאינים מתרכזים בשלב חומר הניקוי, ואילו חלבונים הידרופיליים נשארים בשלב הימי.

צנטריפוגה בטמפרטורת החדר לשמירה על ההפרדה הדו-פאזית.

השליכו את השלב הימי, הוסיפו חיץ קר לשלב חומר הניקוי וערבבו.

חזור על מחזור הקירור, ההתחממות והצנטריפוגה כדי להעשיר ליפופרוטאינים.

לאחר מכן, הוסף חיץ קר וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה כדי לגלול את האגרגטים שאינם ליפופרוטאין.

העבירו את הסופרנטנט לצינור המכיל ממס מזרז חלבון ודגרו בטמפרטורה מתחת לאפס כדי לזרז ליפופרוטאינים.

צנטריפוגה בטמפרטורת החדר והשליכו את הסופרנטנט.

הליפופרוטאינים המשקעים מוכנים למחקרים במורד הזרם.

השלם את הסופרנטנט עם חומר פעילי שטח TX-114 לריכוז סופי של 2% על ידי הוספת נפח שווה של 4% פעילי שטח ב-TBSE קר כקרח. דגרו את הסופרנטנט התוסף על קרח למשך שעה, תוך ערבוב על ידי היפוך כל 15 דקות. העבירו את הצינור לאמבט מים של 37 מעלות צלזיוס, ודגרו למשך 10 דקות כדי לגרום להפרדת פאזה.

צנטריפוגה את הדגימה ב-10,000 פעמים גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדי לשמור על