אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:01 דק׳ • October 30th, 2025
קח עמודת כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל עמוסה בחרוזי ג'ל כדוריים נקבוביים.
איזון העמודה עם מאגר השומר על השלמות המבנית של החלבונים במהלך ההפרדה.
טען תמצית חיידקים מטוהרת המכילה חלבוני תחום נורו-וירוס אנושי בביטוי רקומביננטי ושאריות זיהומי חלבון.
הוסף את המאגר כדי להעביר את הדגימה דרך העמודה.
זיהומים שיוריים גדולים אינם יכולים להיכנס לנקבוביות ולעבור דרך הרווחים שבין החרוזים, ונפלטים תחילה.
עקוב אחר הפליטה באמצעות ספיגת UV. שיא קטן מעיד על זיהומים היוצאים מהעמוד.
לעומת זאת, חלבוני תחום P הקטנים נכנסים לנקבוביות החרוזים, עוברים נתיב ארוך יותר ונפלטים מאוחר יותר. עלייה בשיא הספיגה מעידה על פליטת חלבוני תחום P.
אסוף את השברים המנופחים המכילים את חלבוני תחום P, המוכנים כעת לניתוח נוסף.
שטפו את המשאבות והצינורות של מערכת טיהור הכרומטוגרפיה הנוזלית בעלת הביצועים הגבוהים, ואזנו מראש את עמודת הכרומטוגרפיה של אי הכללת הגודל עם מאגר סינון ג'ל. הזרקו את תחום ה-P לעמודה בקצב זרימה של מיליליטר לדקה, באמצעות סופרלופ או לולאה, בהתאם לנפח הדגימה המרוכזת. לאחר סיום ההזרקה, הגדל את קצב הזרימה ל -2.5 מיליליטר לדקה.
ככל שהצפיפות האופטית עולה, ותחום ה-P יורד מהעמודה, אסוף שברים של 1.5 מיליליטר. תחום P בדרך כלל מסומן כדימר.