טיהור סלקטיבי של חלבון חיידקי על ידי כרומטוגרפיה שלילית של חילופי יונים

התחל עם תמיסת שרף חילופי יונים המכילה קבוצות פונקציונליות טעונות חיובית לקשירת חלבון סלקטיבית.

לאחר מכן, קחו תמצית חלבון המתקבלת מתאי חיידקים מארחים שהונדסו לבטא יתר על המידה גורם אלימות מהחיידק הפתוגני הליקובקטר פילורי.

התמצית מכילה את גורם האלימות המטרה יחד עם חלבוני תא מארח במאגר ב-pH 8.

מערבבים את תמצית החלבון עם השרף ודוגרים בתסיסה כדי להבטיח אינטראקציה אחידה בין חלבון לשרף.

חלבונים מארחים, בעלי נקודות איזואלקטריות נמוכות מה-pH של המאגר, הופכים טעונים שלילית ונקשרים לשרף הטעון חיובית.

חלבון המטרה, עם נקודה איזואלקטרית קרובה ל-pH המאגר, נשאר ברובו לא טעון ונשאר לא קשור.

העבירו את תמיסת החלבון-שרף לעמודת כרומטוגרפיה ואפשרו לשרף להתייצב.

אסוף את השלב הנוזלי המכיל את חלבון המטרה הלא קשור.

שטפו את השרף עם המאגר כדי להבטיח התאוששות מקסימלית של חלבון המטרה.

להכנת 15 מיליליטר של שרף DEAE, השעו 0.6 גרם אבקה יבשה של שרף DEAE ב-30 מיליליטר של מאגר Tris-HCl בטמפרטורת החדר למשך יום אחד לפחות.

צנטריפוגה של השרף ב-10,000 פעמים גרם בארבע מעלות צלזיוס למשך דקה אחת ואז הסר והשליך את הסופרנטנט. לאחר מכן, הוסף 15 מיליליטר של מאגר Tris-HCl. לאחר חזרה על הצנטריפוגה, ההשעיה מחדש מדרגה ארבע פעמים נוספות, אחסן את 15 מיליליטר השרף המיושב בארבע מעלות צלזיוס לשימוש לאחר מכן.

עובדים בארבע מעלות צלזיוס, מוסיפים 45 מי