נוהל לטיהור חלבון מתויג פוליהיסטידין מסטרפטוקוקוס מוטנס

קחו תרבית של סטרפטוקוקוס מוטנס המבטא חלבון מתויג פוליהיסטידין המופרש למדיום.

צנטריפוגה את התרבית ואיסוף הסופרנטנט העשיר בחלבון.

מוסיפים אמוניום גופרתי ודוגרים תוך ערבוב כדי לזרז חלבונים על ידי הפחתת מסיסותם.

העבירו את התמיסה לצינור, צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.

השעו מחדש את הגלולה במאגר מקשר המכיל מלחים ואימידזול נמוך כדי לייצב את החלבון.

דיאליזה של התמיסה כנגד מאגר קשירה טרי כדי להסיר עודפי מלחים.

צנטריפוגה את תמיסת הדיאליזה כדי לגלול פסולת בלתי מסיסה, ואז לסנן את הסופרנטנט.

מערבבים את התסנין עם שרף זיקה טעון ניקל ודוגרים כדי לאפשר קשירה סלקטיבית של החלבון המתויג בפוליהיסטידין ליוני הניקל.

טען את התערובת על עמודת הכרומטוגרפיה ושטוף עם מאגר מחייב כדי להסיר חלבונים לא קשורים.

לאחר מכן, הוסף מאגר פליטה עם אימידזול גבוה כדי לעקור היסטידין מיוני ניקל ולשחרר את החלבון המתויג בפוליהיסטידין.

יש לאסוף את החומר המכיל את החלבונים המטוהרים.

צנטריפוגה תרבית החיידקים מתלה למשך 20 דקות ב-10,000 פעמים גרם בארבע מעלות צלזיוס.

העבירו את חומר התרבות לכוס זכוכית של שלושה ליטר. כדי לרכז את החלבונים מהסופרנטנט התרבית, הניחו את הסופרנטנט בנפח שני ליטר על בוחש מגנטי והתחילו לערבב נמרצות. מוסיפים 1,122 גרם אמוניום גופרתי ומאפשרים למשקעים להיווצר תוך ערבוב נמרץ בארבע מעלות צלזיוס במשך תקופה של 4 שעות או למשך הלילה.