מדידת קשירת תרופות לקזאום מנגעי שחפת בשיטת דיאליזה בשיווי משקל מהיר

קחו תרחיף הומוגני של קזאום - החומר הנמק והעשיר בשומנים מנגעי שחפת, המכיל מיקובקטריות עמידות לתרופות בליבתו.

הוסף את תרופת הבדיקה להומוגנאט ולמערבולת כדי להקל על האינטראקציה שלה עם מטריצת הקזאום.

הנח תאי תורם ומקלט המכילים דיאליזה בשיווי משקל מהיר המופרדים על ידי קרום חדיר למחצה לתוך לוחית הבסיס.

טען את ההומוגנאט עם התרופות לתוך תא התורם והוסף חיץ לתא המקלט.

אוטמים את הצלחת ודוגרים בסיבוב.

במהלך הדגירה, התרופה החופשית מתפזרת על פני הממברנה, ומגיעה לשיווי משקל בין שני החדרים.

לאחר הגעה לשיווי משקל, יש לדלל את דגימת התורם עם בופר ואת דגימת המקבל עם הומוגנט נטול תרופות כדי לנרמל את תנאי המטריצה לכימות תרופות.

לבסוף, כמת את ריכוז התרופה וחשב את שבר התרופה הלא קשור או פו.

ה-fu משקף את התרופה החינמית הזמינה להתפזר לתוך קזאום ולהגיע למיקובקטריות עמידות לתרופות.

הוסף 6.5 מיקרוליטר מתרכובת הבדיקה המוכנה ל -643.5 מיקרוליטר של ההומוגנט. להשיג את הריכוז הסופי של חמישה מיקרומולר ומערבולת.

לאחר מכן, הניחו את התוספות האדומות בצלחת הבסיס. הכן את התוספות לכל בדיקה, כל תרכובת משולשת.

הוסף 200 מיקרוליטר של המטריצה עם התרופות לתוך תא התורם האדום של כל תוספת אדומה. לאחר מכן, הוסף 350 מיקרוליטר PBS לכל תא מקלט.

הניחו אטם דבק על הצלחת ודגרו אותו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס על המיקסר התרמי ב -200 סיבובים לדקה למשך ארבע שעות. לאחר הדגירה, ערבבו בעדינות את תכולת תאי התורם והמקבל על ידי פיפטינג למעלה ולמטה פעמיים עד שלוש. העבירו 20 מיקרוליטר הומוגנט מכל אחד מתאי התורמים ל -20 מיקרוליטר PBS נקי בצינור של 1.5 מיליליטר.

באופן דומה, העבירו 20 מיקרוליטר של דגימות PBS מתאי המקלט ל-20 מיקרוליטר של הומוגנט נקי.

התאמת מטריצה מבטלת את הצורך בשתי עקומות ראיית צבע נפרדות בהומוגנאט וב-PBS לניתוח כמותני. תכולת תא התורם עלולה לשקוע עם הזמן. מערבבים בעדינות את התכולה על ידי פיפטינג לפני הסרת האליקוטים.